試劑盒加樣需要注意的問(wèn)題
ELISA試劑盒目前臨床上使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測(cè)的血清標(biāo)本的收集則沒(méi)有時(shí)間和體位方面的影響，用于ELISA試劑盒測(cè)定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清（漿），有時(shí)由于特定的檢測(cè)目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定的血清標(biāo)本的收集，要留意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。人ELISA試劑盒再如治療藥物的檢測(cè)，應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測(cè)。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí)，血清中腎素活性將泛起顯著增高。如可的松在早晨4～6點(diǎn)之間，會(huì)有一峰值泛起：生長(zhǎng)激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式開(kāi)釋?zhuān)虼?，在測(cè)定此類(lèi)激素時(shí)，有必要在緊密親密相連的時(shí)間距離內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其中間值為測(cè)定值。
臨床ELISA試劑盒測(cè)定現(xiàn)通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測(cè)定模式，測(cè)定操作非常簡(jiǎn)單，一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結(jié)果判斷和結(jié)果報(bào)告及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會(huì)影響測(cè)定結(jié)果，人ELISA試劑盒且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。正確的加樣方法應(yīng)為45度，吸頭貼著孔壁加入，應(yīng)注意角度太小，會(huì)使液體殘留在孔壁上，導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確；吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處！
只是在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面：
首先要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離，則可以在2～8 ℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存，應(yīng)在-70 ℃以下。樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長(zhǎng)，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。ELISA試劑盒此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。
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