1、取材與固定:
從人或動(dòng)物新鮮尸體上取下組織塊(一般厚度不超過0.5厘米)投入預(yù)先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液等)使組織、ELISA細(xì)胞的蛋白質(zhì)變性凝固,以防止細(xì)胞死后的自溶或細(xì)菌的分解,從而保持細(xì)胞本來的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
2、脫水透明:
一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精,又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出組織塊的中酒精,ELISA才能浸蠟包埋。
3、浸蠟包埋:
將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中,放入溶蠟箱保溫。待石蠟*浸入組織塊后進(jìn)行包埋:先制備好容器(如折疊一小紙盒),倒入已溶化的石蠟,迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬,才能在切片機(jī)上切成很薄的切片。(生物秀實(shí)驗(yàn)頻道www.bbioo。。com)
4、切片與貼片:
將包埋好的蠟塊固定于切片機(jī)上,切成薄片,一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折,要放到加熱的水中燙平,再貼到載玻片上,放45℃恒溫箱中烘干。
5、脫蠟染色:
常用HE染色,以增加組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)各部分的色彩差異,利于觀察。蘇木精(Hematoxylin,H)是一種堿性染料,可將細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)核糖體染成藍(lán)紫色,被堿性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿性。伊紅(Eosin,E)是一種酸性染料,能將ELISA細(xì)胞質(zhì)染成紅色或淡紅色,被酸性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸性。染色前,須用二甲苯脫去切片中的石蠟,再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精,zui后入蒸餾水,就可染色。