細胞培育是試驗室里zui常見和zui基本的實驗,但是不是zui簡單的。別以為細胞培育是一件簡單的事,這里也蘊藏著許多學(xué)問。有的時候細胞狀況不好的話,會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染、藥篩這些實驗底子沒辦法做。影響細胞培育的因素有很多,我們先從培養(yǎng)基和血清開始說。
經(jīng)典的細胞培養(yǎng)基有很多種,例如Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是運用zui廣泛的。其他的例如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培育。
◆MEM是由Eagle’s基礎(chǔ)培育基(BME)開展而來的,其間添加了成分的規(guī)格及濃度。
◆Dulbecco改進的BEM(DMEM)培養(yǎng)基是專為小鼠成纖維細胞準(zhǔn)備的,常用于貼壁細胞的培育。DMEM中氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,選用雙倍的HCO3-和CO2濃度可以起到十分好的緩沖效果。開端的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,后來為了滿足某些細胞的成長需求,將葡萄糖含量調(diào)整為4500 mg/L,這就是我們常說的低糖和高糖了。
◆aMEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸,它可以廣泛用于各種細胞類型,包括對營養(yǎng)成分需求嚴(yán)苛的細胞。
◆Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而規(guī)劃的,如今也廣泛運用于克隆構(gòu)成率的剖析及原代培育。F12還能夠與DMEM等體積混合運用,得到一種高濃度與成分多元化相的產(chǎn)品,這種培養(yǎng)基已運用于許多原代培育及更難養(yǎng)的細胞系的培育。
◆RPMI 1640培養(yǎng)基是用于淋巴細胞培育的,如今已廣泛用于懸浮細胞的培育。