1、為什么在免疫組化中標(biāo)本要進(jìn)行固定?
(1)防止標(biāo)本從玻片上脫落;
(2)除去防礙抗原-抗體結(jié)合的類脂,使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果;
(3)固定的標(biāo)本易于保存。
2、標(biāo)本固定的基本原則是什么?
(1)不能損傷細(xì)胞內(nèi)的抗原;
(2)不能凝集蛋白質(zhì);
(3)不能損傷細(xì)胞形態(tài);
(4)固定后應(yīng)保持細(xì)胞膜的通透性,以允許抗體進(jìn)入與抗原結(jié)合。
3、常用抗原物質(zhì)的固定方法的*選擇是什么?
(1)丙酮的作用是溶解膜磷脂,所有的脂質(zhì)雙層(胞膜、核膜、細(xì)胞器膜等)已被破壞,但蛋白和多糖類不受影響。而丙酮固定后不需進(jìn)行抗原修復(fù),它是一種非交聯(lián)固定劑。
(2)多聚甲醛固定對(duì)酶類和脂類保護(hù)的好,易與蛋白發(fā)生交聯(lián),所以一般經(jīng)過甲醛或PFA固定后的標(biāo)本一般需要抗原修復(fù)。
(3)蛋白質(zhì)抗原:95%~*乙醇;
(4)酶、激素:丙酮;
(5)免疫球蛋白:*;
(6)病毒:丙酮、*、無水乙醇;
(7)多糖、細(xì)菌等:微火加熱,甲醇、10%甲醛、丙酮;
(8)類脂(異嗜性抗原):10%甲醛,10%佛茂爾(ForMol)。