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小鼠抗人kappa雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)

點(diǎn)擊次數(shù):720 更新時(shí)間:2021-06-23
 

小鼠抗人kappa雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn):
1. 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,無(wú)菌室和無(wú)菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌,用70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面,并且打開(kāi)無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后,才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株,即使培養(yǎng)基*相同也不可共用培養(yǎng)基,以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后,請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái),用70%ethanol再次擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后,才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。
2. 無(wú)菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞,必要物品(試管架、吸管、吸取器或吸管盒等)可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出,有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)在臺(tái)面的中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)完成,請(qǐng)勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行操作。
3. 小心取用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)物品,避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處,也不要在打開(kāi)的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開(kāi)后,請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身,傾斜大約45°角取用,盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全,必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來(lái)自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行(至少是Class II)。操作過(guò)程中,應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生,小心有毒性藥品,例如DMSO和TPA等,并避免針頭的傷害等等。
5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目:
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤(pán)是否有污染(水盤(pán)的水需用無(wú)菌水,每周定時(shí)更換)。
5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力,定期更換紫外線燈管和HEPA過(guò)濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),3000小時(shí)/HEPA)。
6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑(Zephrin 1:750),需定期更換水槽中的水。

 
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