目前主流的實時熒光定量
RT-PCR法(QuantitativeReal-timePCR)分為染料法和探針法，染料法以SYBRGreen法為代表，SYBRGreen染料游離時熒光微弱，但但一旦與雙鏈DNA結合后，熒光大大增強，反應管中的熒光強度與反應管中雙鏈DNA的數(shù)量成正比例關系，因此可以通過檢測熒光計算反應管中產(chǎn)生的雙鏈DNA(PCR產(chǎn)物)的量，但該方法沒有特異性，非特異性擴增的產(chǎn)物也會被計入。對于探針法來說，反應管中的熒光強度也是檢測PCR產(chǎn)物量的依據(jù)。但其發(fā)光機制卻與染料法*不同。
SYBRGreen檢測模式是一種能與雙鏈DNA結合發(fā)光的熒光大增強。因此，SYBRGreen的檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。由于SYBRGreen沒有特異性，不能識別特定的雙鏈，只要是雙鏈就會結合發(fā)光，對PCR反應中的非特異性擴增或引物二聚體也會產(chǎn)生熒光，所以在臨床上使用可能會有假陽性發(fā)生。SYBRGreen的優(yōu)點是因為其缺點產(chǎn)生，由于它能所有的雙鏈DNA相結合，所以對不同模板不需特別定制不同的，這對科研是很有利的。
RT-PCR法的技術原理是采用雙重PCR技術和Taqman探針技術相結合，針對樣品的特異性序列設計引物和探針，通過監(jiān)測不同熒光通道的熒光信號變化，檢測MTB感染。該技術具有特異性強、靈敏度高、簡便易行等優(yōu)點。大量研究顯示，RT-PCR技術在標本快速診斷中具有重要的臨床價值。
關于RT-PCR法的兩種熒光定量檢測就是就到這里了，希望看完這篇文章能對你有所幫助！
