普氏立克次體(RP)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)準(zhǔn)備試劑與收集血樣：
雙重核酸試劑盒（熒光PCR法） 1. 收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（ -20 ℃或 -70 ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。
3. 10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。
4. 洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）
檢測(cè)程序：
1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測(cè) 吸光值。
性能：
1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：檢測(cè)濃度小于0.1 U/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個(gè)月
黑人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞；RAJI
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞；RAMOS
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞；RAMOS(RA.1)
人腦瘤細(xì)胞；SF126
人腦瘤細(xì)胞；SF763
人腦瘤細(xì)胞；SF767
人皮膚黑色素瘤細(xì)胞；SK-MEL-1
人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞；SW-13
人結(jié)直腸癌細(xì)胞；T84
人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞；THP-1
人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞；U251
人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞；U937 [U-937]
人胃腺癌細(xì)胞；BGC-823
人低分化肺腺癌細(xì)胞；GLC-82 [GLC82]
人喉癌上皮細(xì)胞；Hep-2
人纖維肉瘤細(xì)胞；HT-1080
人絨癌細(xì)胞；JEG-3
人耐VP16絨癌細(xì)胞株；JEG-3/VP16
白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞；JEG-3/VP16-IL-2
TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞；JEG-3-VP16-TNFa
人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞；Jurkat, Clone E6-1
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；BE(2)-M17
人乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-157
人成骨肉瘤細(xì)胞；MG-63
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H446
人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞；RPMI-8226 [RPMI8826]
人腦瘤細(xì)胞；SF17
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