熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。
探針法熒光PCR檢測試劑盒通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測，可以實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。
熒光是指一種光致發(fā)光的冷發(fā)光現(xiàn)象。當(dāng)某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長的入射光照射，吸收光能后進(jìn)入激發(fā)態(tài)，并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光的波長長的出射光。其原理為：光照射到某些原子時(shí)，光的能量使原子核周圍的一些電子由原來的軌道躍遷到了能量更高的軌道，即從基態(tài)躍遷到第一激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等。第一激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等是不穩(wěn)定的，所以會恢復(fù)基態(tài)，當(dāng)電子由第一激發(fā)單線態(tài)恢復(fù)到基態(tài)時(shí)，能量會以光的形式釋放，所以產(chǎn)生熒光。與傳統(tǒng)PCR一樣，探針法熒光PCR檢測試劑盒反應(yīng)在溫度模塊里循環(huán)進(jìn)行；理論上每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)目的基因的數(shù)量都會增加一倍；每個(gè)循環(huán)結(jié)束后，定量PCR儀器通過不同的濾光片記錄熒光信號；在擴(kuò)增過程中，熒光信號隨著PCR產(chǎn)物的增加而增強(qiáng)。
探針法熒光PCR檢測試劑盒探針法的本質(zhì)是利用了熒光共振能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，探針上存在一對能產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移的基團(tuán)，利用PCR反應(yīng)中的一些過程(酶切，雜交等)，使兩個(gè)基團(tuán)的距離產(chǎn)生變化，使系統(tǒng)中的熒光強(qiáng)度或者熒光種類發(fā)生變化，這種變化又與PCR產(chǎn)物的種類和量有直接關(guān)系，通過檢測這種變化，我們就可以檢測出PCR反應(yīng)體系中產(chǎn)物的種類和量。
