利用離心柱內硅基質膜提取RNA，在反轉錄酶的作用下，以RNA為模板，以引物為起點合成與RNA模板互補的cDNA鏈。在TaqDNA聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性、低溫退火、中溫延伸的循環(huán)，使特異DNA片段的拷貝數(shù)放大一倍。經(jīng)過35次循環(huán)，最終使擴增DNA片段放大了數(shù)百萬倍。將擴增DNA片段進行電泳，經(jīng)染色后，在紫外燈照射下，肉眼可見到DNA片段的擴增帶。
探針法熒光PCR檢測試劑盒的樣品處理：
1、適用標本類型：發(fā)病動物血液、空腸及小腸腸內容物及組織臟器(腸道組織、腸系膜及淋巴結等)和病毒培養(yǎng)液。
2、標本采集，方法如下：
(1)血清：用一次性注射器取靜脈血2-3ml，轉至5ml的干燥管中，密閉送檢。
(2)腸內容物：無菌條件下取腸道內容物約1g左右，置入1ml含有1.0mlPBS(或生理鹽水)的5ml離心管中，立即送檢。
(3)組織臟器：取發(fā)病動物腸道組織及腸系膜淋巴結等組織約1g，置一1.5ml的潔凈離心管中，密閉送檢。
3、應避免標本間交叉污染。
4、標本收集后可立即檢測；若不能立即檢測，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存，標本應凍存于-80℃以下，避免反復凍融。
