IBL elisa試劑盒利用的是夾心法。包被孔內(nèi)包被了抗原，用對人IgM有特異性的酶標(biāo)抗體來檢測樣品中的特異性抗體。底物反應(yīng)后，所顯示的顏色的強(qiáng)度與檢測到的IgM特異性抗體的量正比。樣品的結(jié)果可直接用標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得。
IBL elisa試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟：
(1)加100µL標(biāo)準(zhǔn)品和已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中，在定性檢測中只使用標(biāo)準(zhǔn)品B。
(2)封板后室溫(18℃-25℃)溫育60分鐘。
(3)移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。
(4)在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。
(5)封板后室溫(18℃-25℃)溫育30分鐘。
(6)移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時(shí)，如果有條件的話，可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時(shí)間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。
(7)每孔加TMB底物液100µL。
(8)室溫(18℃-25℃)避光溫育20分鐘。
(9)在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動包被板以使試劑混合均勻。此時(shí)，顏色藍(lán)色變成黃色。
(10)加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm處測OD值。
IBL elisa試劑盒的結(jié)果計(jì)算：
在半對數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動生成的方法，以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸，濃度為X軸，繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對數(shù)圖或?qū)?shù)-對數(shù)圖都可獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
