PCR-熒光探針法是一種在PCR反應(yīng)中利用特定熒光探針實現(xiàn)等量擴(kuò)增和實時檢測的方法,其具有以下特點:
1、高靈敏度:可以檢測到非常低濃度的靶分子,其靈敏度可以達(dá)到單個分子的水平,對樣本的檢測結(jié)果也非常準(zhǔn)確。
2、高特異性:熒光探針的設(shè)計可以使其只與目標(biāo)DNA序列的特定區(qū)域結(jié)合,并且將靶標(biāo)和非靶標(biāo)分子之間的差異擴(kuò)大,從而減少假陽性率。
3、實時檢測:熒光探針法的實時檢測方式可以在PCR反應(yīng)過程中監(jiān)測擴(kuò)增產(chǎn)物的積累,有效提高了分析速度和靈敏度。
4、多重檢測:可以同時檢測多個目標(biāo)序列,從而大大提高了檢測效率和結(jié)果的可靠性,并且可以同時檢測不同的細(xì)菌菌種等。
5、可定量檢測:熒光信號的強度與產(chǎn)物的數(shù)量成正比,可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法將熒光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的分子數(shù),實現(xiàn)數(shù)量級定量檢測。
6、操作簡便:不需要任何吸光度檢測、凝膠電泳等步驟,只需要添加熒光探針和引物,將反應(yīng)體系加熱到合適的溫度后,直接進(jìn)行PCR反應(yīng)即可。
總之,PCR-熒光探針法的特點是高靈敏度、高特異性、實時檢測、多重檢測、可定量檢測以及操作簡便等,這些優(yōu)勢使得該方法在分子生物學(xué)、臨床診斷、食品安全檢測等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。