小鼠ELISA試劑盒是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法，用于檢測小鼠樣本中特定蛋白質(zhì)的濃度。下面是一般的
小鼠ELISA試劑盒操作步驟：
1、樣本處理：
a.收集小鼠組織或液體樣本，如血清、血漿或細(xì)胞上清。
b.將收集的樣本置于離心管中，并離心10-15分鐘以去除固體顆粒和細(xì)胞殘渣。
c.將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，避免帶入沉淀。
d.如有必要，將樣本進(jìn)行稀釋，以確保其濃度處于試劑盒檢測范圍內(nèi)。
2、準(zhǔn)備試劑：
a.將試劑盒中的所有試劑和標(biāo)準(zhǔn)物品室溫恢復(fù)至室溫。
b.打開并標(biāo)記試劑瓶，以避免混淆。
c.預(yù)先稀釋試劑盒中的穩(wěn)定洗滌緩沖液，按照說明書中的建議進(jìn)行稀釋。
3、酶標(biāo)板涂層：
a.取出所需數(shù)量的酶標(biāo)板，并用洗滌緩沖液洗滌。
b.向每個酶標(biāo)板孔中加入所需的涂層抗體或其他適當(dāng)?shù)脑噭?br />
c.封閉孔板，并在37°C下靜置1-2小時，或根據(jù)說明書上的指導(dǎo)進(jìn)行孵育。
4、洗滌：
a.將洗滌緩沖液加入洗滌緩沖液槽中。
b.倒掉洗滌緩沖液槽中的液體，將酶標(biāo)板孔倒置在紙巾上以排出殘留液體。
c.將每個孔部分填滿洗滌緩沖液，然后輕輕拍打孔板以去除液體。
d.重復(fù)以上步驟3次，確保充分洗滌。
5、樣本添加：
a.向每個酶標(biāo)板孔中加入已稀釋的樣本、對照標(biāo)準(zhǔn)品和負(fù)對照。
b.封閉孔板，并在室溫下孵育一段時間，按照說明書上的要求進(jìn)行。
6、洗滌：
a.重復(fù)步驟4中的洗滌步驟，以去除未結(jié)合的物質(zhì)。
7、底物加入：
a.向每個酶標(biāo)板孔中加入底物溶液。
b.封閉孔板，并在室溫下進(jìn)行孵育，按照說明書上的建議時間。
8、停止反應(yīng)：
a.向每個酶標(biāo)板孔中加入停止溶液，以終止化學(xué)反應(yīng)。
9、測量讀數(shù)：
a.使用酶標(biāo)儀測量各個孔的吸光度值，一般為450nm或其他特定波長。
b.將吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，計算樣本中目標(biāo)蛋白質(zhì)的濃度。
