煙曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒使用方法
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
按照試劑盒操作說(shuō)明或者微生物樣品處理方法做好樣品前處理。
1.2 DNA 提取
根據(jù)您實(shí)驗(yàn)室的具體情況和樣品類型，選擇適當(dāng)?shù)奶崛〔呗苑椒ā榱耸箤?shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定、有效、可靠，我們建議使用商品化的試劑盒進(jìn)行提取，嚴(yán)格按照對(duì)應(yīng)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，樣本核酸提取過(guò)程中應(yīng)避免污染，提取好的模板樣品如不能立即檢測(cè)，建議-15℃以下保存。
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2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
2.1 從-15℃以下冰箱中取出試劑盒平衡到室溫（20～25℃），注意避免強(qiáng)光照射，待溶解后振蕩混勻并低速離心 10 s，使用低吸附吸頭分液取樣，避免試劑損失和浪費(fèi)。
2.2 根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑
煙曲霉反應(yīng)液
煙曲霉擴(kuò)增液
用量（樣本數(shù)為N）
19.5μL
0.5μL
2.3 在適當(dāng)容積的無(wú)菌離心管中加入上述試劑，充分振蕩混勻后 2000 rpm 離心 10 s，按照 20 μL/管分裝量將試劑分裝至八聯(lián) PCR 反應(yīng)管中。
2.4 蓋緊八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋, 并注意做好相應(yīng)標(biāo)識(shí)（請(qǐng)標(biāo)記在八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋兩端突出部位，切勿標(biāo)記在八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋中間，以免影響信號(hào)采集）。將 PCR 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移至樣本準(zhǔn)備區(qū)，剩余試劑放回-15℃以下冰箱冷凍保存。
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1.2 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心，核酸加樣過(guò)程中應(yīng)避免污染。
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