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HPLC使用過程中常見問題及解決方法

點(diǎn)擊次數(shù):2174 更新時(shí)間:2010-11-24
 

HPLC使用過程中常見問題及解決方法
1. 排氣閥里的過濾經(jīng)常芯堵塞
如果是排氣閥里的過濾芯堵塞引起的壓力升高,請(qǐng)仔細(xì)檢查一下?lián)Q下來的過濾芯。正常情況下,一個(gè)過濾芯可以使用6個(gè)月左右,如果經(jīng)常更換就有問題。
- 如果過濾芯的顏色發(fā)黑,說明是被柱塞密封墊磨損下來的碎屑堵塞的,請(qǐng)確認(rèn)流動(dòng)相使用的緩沖鹽的濃度是否太高了,是否使用了柱塞清洗裝置。 緩沖液在泵頭內(nèi)部析出的鹽的結(jié)晶會(huì)加速密封墊的磨損。
- 如果過濾芯的顏色是乳白色的,非常干凈。說明過濾芯很有可能是被流動(dòng)相污染了。 請(qǐng)檢查一下您是否使用了過期的溶劑(水,有機(jī)溶劑),或質(zhì)量不好的溶劑。請(qǐng)馬上更換別的品牌的溶劑或使用純凈水(推薦:娃哈哈純凈水)。
如果流動(dòng)相經(jīng)過了濾膜過濾,請(qǐng)確認(rèn)是否使用了正確的,的濾膜。建議您先不要使用濾膜過濾流動(dòng)相,看看是否可以解決過濾芯堵塞的問題。
- 如果存放緩沖液或水的溶劑瓶不經(jīng)常清洗,該通路會(huì)生長藻類,藻類會(huì)污染整個(gè)流路系統(tǒng)和脫氣機(jī)的腔體,藻類及其代謝產(chǎn)物也會(huì)堵塞過濾芯。如果發(fā)生了這種情況,建議用60度的熱水清洗溶劑瓶,并用異丙醇清洗整個(gè)管路和脫氣機(jī)。建議以后一定要用棕色瓶存放緩沖溶液,避光,并且定期清洗溶劑瓶。
HPLC使用過程中常見問題及解決方法
2.峰面積或峰高重現(xiàn)性不好,偏差大
如果HPLC系統(tǒng)配有自動(dòng)進(jìn)樣器,這種情況主要是自動(dòng)進(jìn)樣器的問題。
- 首先確認(rèn)柱前壓是穩(wěn)定的,保留時(shí)間的重現(xiàn)性好(參見第1,2條)
- 將自動(dòng)進(jìn)樣器的抽樣速度降低到50ul/min以下 (默認(rèn)值是200ul/min).您的樣品有可能粘度較大,降低抽樣速度可以極大地改善粘度較大的樣品的進(jìn)樣精度。
- 如果進(jìn)樣針或針座有輕微的堵塞,對(duì)進(jìn)樣精度的影響也非常大。請(qǐng)參考第5條的處理辦法。
- 如果是手動(dòng)進(jìn)樣器,請(qǐng)確認(rèn)一定要使用Agilent配的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣針,且進(jìn)樣器的廢液出口要與進(jìn)樣口水平,避免虹吸的影響。如果是滿Loop進(jìn)樣,建議注
射5倍Loop的進(jìn)樣體積。
HPLC使用過程中常見問題及解決方法

 
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