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流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)人和小鼠Th細(xì)胞亞群

點(diǎn)擊次數(shù):2493 更新時(shí)間:2010-11-08
 

早在1986年Mosmann等[1]依據(jù)小鼠分泌的細(xì)胞因子譜不同將Th細(xì)胞分為Th1和Th2兩個(gè)功能不同的獨(dú)立亞群。Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、、IL-12、IFN-γ和TNF- α等細(xì)胞因子,介導(dǎo)與細(xì)胞毒和局部炎癥有關(guān)的免疫應(yīng)答,參與細(xì)胞免疫及遲發(fā)型超敏反應(yīng)。Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5、 IL-6、IL-10和IL13等細(xì)胞因子,其主要功能為刺激B細(xì)胞增殖并產(chǎn)生抗體,與體液免疫相關(guān)。由于Th1/Th2 亞群及其相互之間的平衡在免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵的作用,Th1/Th2 平衡的失調(diào)與多種疾病的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后有著密切的關(guān)系。目前已發(fā)現(xiàn)許多感染性疾病、自身免疫性疾病、過(guò)敏性疾病以及移植排斥反應(yīng)等都與Th1/Th2 平衡有關(guān)。因此建立穩(wěn)定有效的細(xì)胞內(nèi)因子檢測(cè)方法對(duì)于準(zhǔn)確說(shuō)明Th1/Th2細(xì)胞的作用非常重要。目前檢測(cè)的主要方法有酶聯(lián)免疫法、ELISPOT法、熒光定量法及原位雜交等方法。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)因子是一種相對(duì)快速、重復(fù)性好并能準(zhǔn)確定量的方法。我們參照國(guó)內(nèi)外的一些文獻(xiàn),對(duì)于人和小鼠Th1和Th2細(xì)胞的流式檢測(cè)方法進(jìn)行了探索,并比較了兩者之間的不同。

材料與方法
試劑
PMA(Sigma)
貯存液:PMA 溶于DMSO 濃度為0.1mg/ml -20℃ 保存。
工作液:貯存液1:100 稀釋于RPMI 1640培養(yǎng)基中,此時(shí)為1µg/ml。
Ionomycin(Sigma)
貯存液:Ionomycin 溶于DMSO 濃度為1mg/ml -20℃ 保存。
工作液:貯存液1:20 稀釋于RPMI 1640 培養(yǎng)基中,此時(shí)為50µg/ml。
GolgiStop(內(nèi)含Monensin ,BD Pharmingen)
Cytofix/Cytoperm液、Perm/Wash液和FACS Lysing Solution,均購(gòu)自BD Pharmingen。

抗體
細(xì)胞表面標(biāo)記抗體:抗人CD3-APC,CD8-PercP,CD8-CYC,CD4-CYC??剐∈驝D4-CYC、CD8PE。
細(xì)胞內(nèi)因子抗體:抗人IL-4-PE, IFN-γ-FITC??故驣L-4-PE, IFN-γ-FITC。以上抗體均購(gòu)自BD Pharmingen。

 

 
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