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關(guān)于HPLC的常見問題及解答

點(diǎn)擊次數(shù):1077 更新時(shí)間:2011-04-13
 

一、問:用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移,有時(shí)發(fā)生快速變化,原因何在?如何解決?

  答:關(guān)于漂移問題:

  1.溫度控制不好,解決方法是采用恒溫裝置,保持柱溫恒定

  2.流動(dòng)相發(fā)生變化,解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等

  3.柱子未平衡好,需對(duì)柱子進(jìn)行更長時(shí)間的平衡

  關(guān)于快速變化問題

  1.流速發(fā)生變化,解決辦法是重新設(shè)定流速,使之保持穩(wěn)定

  2.泵中有氣泡,可通過排氣等操作將氣泡趕出。

  3.流動(dòng)相不合適,解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合

  二、問:液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?

  答:1.篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。

  2.存在干擾峰,解決辦法為使用較長的柱子,改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子

  三、問:HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

  答:1.樣品量不足,解決辦法為增加樣品量 醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理

  2.樣品未從柱子中流出??筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子

  3.樣品與檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器

  4.檢測器衰減太多。調(diào)整衰減即可。

  5.檢測器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)

  6.檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。

  7.檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。

  8.記錄儀測壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。

  9.流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。

  10.檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,重作校正曲線。

  四、問:做HPLC分析時(shí),柱壓不穩(wěn)定,原因何在?如何解決?

  答:原因可能有:

  1.泵內(nèi)有空氣,解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理;

  2.比例閥失效,更換比例閥即可;

  3.泵密封墊損壞,更換密封墊即可;

  4.溶劑中的氣泡,解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣,必要時(shí)改變脫氣方法;

  5.系統(tǒng)檢漏,找出漏點(diǎn),密封即可;

  6.梯度洗脫,這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。

 

 
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