微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

產(chǎn)品名稱：畢赤酵母
貨號(hào)：YS-01J13542
拉丁文: Pichia sp.

分離基物: 小黃赤蜻體內(nèi)

提供形式: 凍干物

安全等級(jí): 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: YM 培養(yǎng)基：酵母提取物，3.0 g 麥芽提取物，3.0 g 葡萄糖，10.0 g 蛋白棟，5.0 g 瓊脂，20.0 g 蒸餾水1000 ml ，pH 6.2 +/- 0.2

生長(zhǎng)條件: 25℃，好氧

存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對(duì)菌落計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜，對(duì)平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。

兔轉(zhuǎn)錄激活因子-5(ATF-5) 5-(2,5-二氧代四基)-3-甲基-3-環(huán)己烯-1,2-二羧酸酐(>95.0%(T))辣椒素受體樣蛋白1抗體

兔白介素1受體II(IL-1R2)4-(2,5-二氧代四-3-基)-1,2,3,4-四氫萘-1,2-二甲酸(>95.0%(HPLC)(T))谷氨酰轉(zhuǎn)酶1抗體

兔III型前膠原(PCIII)三環(huán)[6.4.0.02,7]十二烷-1,8:2,7-四羧酸二酐(>98.0%(GC))T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)蛋白1抗體

兔孤腓肽(OFQ/N)ε-己內(nèi)酯(>99.0%(GC))腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白2(TNFα-IP 2)抗體

兔白介素6受體(IL-6R)β-內(nèi)酯(>95.0%(GC)(T))味覺受體蛋白家族2亞基16抗體

兔脯氨酰羧肽酶(PRCP)DL-交酯(>98.0%(T))線粒體硫氧還蛋白2抗體

兔胃動(dòng)素(MTL)L-(-)-交酯(>98.0%(T))腫瘤壞死因子受體超家族成員5抗體

兔粒特異性抗核抗體(GSANA)  δ-戊內(nèi)酯(>98.0%(GC))瞬時(shí)表達(dá)軸索糖蛋白1抗體

兔促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)DL-3-羥基丁酸(含高分子酯化產(chǎn)品)(>75.0%(T))非受體酪氨酸蛋白激酶2抗體

兔前列腺素F受體(FP)1-(烯酰氧基)-3-(甲基烯酰氧基)-2-(含穩(wěn)定劑MEHQ)(>80.0%(GC))腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白5

兔外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶3(ERK3)烯酸1,3-丁二二甲酯(含穩(wěn)定劑MEHQ)(>95.0%(GC))腫瘤壞死因子C

兔內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF/PK1) 1,6-二(烯酰氧基)-2,2,3,3,4,4,5,5-八氟己烷(>90.0%(GC))轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β4抗體

兔凝血酶敏感蛋白1(TSP1)1,9-雙(烯酰氧基)壬烷(含穩(wěn)定劑MEHQ)(>92.0%(GC))轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β活化激酶結(jié)合蛋白1抗體

兔神經(jīng)膠質(zhì)成熟因子β(GMFβ)1,4-雙(烯酰氧基)丁烷(含穩(wěn)定劑MEHQ)(>90.0%(GC))硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2抗體

兔外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(EMMPRIN/CD147)1,6-雙(烯酰氧基)己烷(含穩(wěn)定劑MEHQ)(>85.0%(GC))MAPK調(diào)控蛋白TRB2抗體

兔叉頭框蛋白O2(FOXO2)1,10-雙(烯酰氧基)葵烷(含穩(wěn)定劑MEHQ)(>90.0%(GC))ATP結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)因子2抗體
畢赤酵母菌種傳代仁果殼小圓孢菌胰島素原抗體

嗜熱脂肪地芽孢桿菌原蛋白轉(zhuǎn)化酶4抗體

耐寒短桿菌膜鈣ATP酶1抗體

黑曲霉磷酸烯酮酸羧激酶抗體

西宮皮生球菌多聚合酶α抗體

阿魏側(cè)耳多聚合酶g抗體

枯草芽孢桿菌神經(jīng)內(nèi)分泌肽QRFP抗體

蘇云金芽孢桿菌巰基氧化酶1抗體