產(chǎn)品名稱：金龜子綠僵菌小孢變種 斜面
貨號：YS-01J13259
拉丁文: Metarhizium anisopliae var. anisopliae

提供形式: 斜面

安全等級: 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 生物防治

培養(yǎng)基: 綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL， 3.0g，七水硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20.0g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。

生長條件: 25-28℃，好氧

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。

Egr1  早期生長應(yīng)答蛋白1抗體橋粒斑蛋白1抗原

EGFRvIII  表皮生長因子受體III型突變體抗體蓬亂蛋白1

EGFR5/CLEC14A  表皮生長因子受體5抗體鳥苷三磷酸酶－發(fā)動(dòng)蛋白2抗體

EGFR  表皮生長因子受體抗體發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白多肽抗原

EGFR  表皮生長因子受體抗體轉(zhuǎn)錄因子E2F-1

EGFP  重組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白抗體轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗原

EGFL8  表皮生長因子樣蛋白8抗體轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗原

EGFL7  類表皮生長因子域7抗體轉(zhuǎn)錄因子E2F-6抗原

EGF(mouse)  表皮生長因子抗體（小鼠）E2 tag多肽抗原

EGF(human)  表皮生長因子抗體（人）膠質(zhì)谷氨酸運(yùn)載蛋白3抗原

EGF  小鼠抗表皮生長因子抗體EB病編碼核蛋白-3

EGF  抗表皮生長因子抗體內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗原

EGF  表皮生長因子抗體（大鼠）內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶2抗原

EGF  表皮生長因子抗體嗜酸性粒陽離子蛋白抗原

EFR3A  EFR3A蛋白抗體外胚層發(fā)育不良抗原
金龜子綠僵菌小孢變種 斜面 規(guī)格微紅微球菌λ輕鏈抗體 N6-Benzyl-5'-ethylcarboxamido Adenosine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

根瘤菌屬溶酶體相關(guān)膜蛋白2抗體 P1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate pentasodium salt  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

糞產(chǎn)堿菌糞亞種肺腺瘤易感蛋白2抗體 P1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate pentaammonium salt 質(zhì)量規(guī)格：> 95%,BR

異常畢赤酵母磷酸化RNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體 N6-Benzyl Adenosine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大腸埃希氏菌腫瘤抑制基因LATS2抗體 Adenosine Kinase Inhibitor 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

氣生馬賽菌磷酸化白F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體 2-Amino Adenosine 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

褐橙指孢囊菌磷酸化腫瘤抑制基因LATS2抗體 5'-Ethylcarboxamido-2',3'-isopropylidene Adenosine 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

鴨疫里氏桿菌磷酸化白F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體 Allopurinol riboside 質(zhì)量規(guī)格：>96.5%,工業(yè)級