熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
L-酪氨酸甲酯TRADD Antibody米諾地爾

L-半胱氨酸乙酯鹽酸鹽LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb二酸單甲酯鹽

L-氨酸乙酯鹽酸鹽GATA-4 (D3A3M) Rabbit mAb2-羥基嘧啶鹽酸鹽

甘氨酸乙酯鹽酸鹽DR5 Antibody2-溴-4'-(三氟甲基)乙酮

L-蛋氨酸乙酯鹽酸鹽;L-甲硫氨酸乙酯鹽酸鹽FLCN (D14G9) Rabbit mAb二氟

L-酪氨酸乙酯鹽酸鹽p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb2-硝基三氟甲

L-天冬氨酸-β-芐酯/L-天冬氨酸-芐酯p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb1,2-二氫-2-異丁氧基喹啉-1-甲酸異丁酯

L-谷氨酸-γ-芐酯MyD88 Antibody甲氧基酸甲酯

L-氨酸芐酯鹽酸鹽β-Actin (8H10D10) Mouse mAb2-巰基煙酸

L-脯氨酸芐酯鹽酸鹽β-Actin (8H10D10) Mouse mAb甲基-5-羥甲基咪唑鹽酸鹽

L-精氨酸-L-谷氨酸鹽TRAIL (C92B9) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-羥甲基噻唑

L-精氨酸-α-酮戊二酸鹽（2:1）GRB10 Antibody(二甲氨基)乙縮二甲

S-乙酰半胱氨酸鹽酸Phospho-SHP-2 (Tyr580) Antibody(3AR,4R,5R,6AS)-基六氫-2-氧代-2H-環(huán)戊并[B]呋喃-5-基 [1,1'-聯(lián)]-甲酸酯

O-叔丁基-L-蘇氨酸甲酯鹽酸鹽ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb2,二氨基-5-溴吡啶

L-氨酸異酯鹽酸鹽ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb甲基-2-并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物

L-精氨酸叔丁酯TNF-α Antibody氯-硝

L-天冬酰甲酯鹽酸鹽JNK1 (2C6) Mouse mAb2-酸

L-天冬氨酸二叔丁基酯鹽酸鹽TGF-β (56E4) Rabbit mAb硫代嗎啉-1,1-二氧化物
鴨腸炎病毒探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒低密度脂蛋白受體(LDLR)ELISA試劑盒TPA/PLAT  組織型纖溶酶原激活劑抗體100 ul

低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)ELISA試劑盒SUZ12/CHET9  胚胎干細(xì)胞抑制蛋白Suz12抗體100 ul

低密度脂蛋白膽固(LDL-C)ELISA試劑盒SP-A   肺表面活性蛋白A抗體20 ul

低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒SPA-1/SIPA-1  信號(hào)感應(yīng)增殖相關(guān)蛋白1抗體100 ul

的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)ELISA試劑盒SPAG5/map126/Astrin  相關(guān)抗原5抗體100 ul

蛋白酸酶(PP)ELISA試劑盒SPARC  富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白抗體100 ul

蛋白聚糖4(PRG4)ELISA試劑盒SP-B  肺表面活性蛋白B抗體20 ul

蛋白激酶G(PKG)ELISA試劑盒SP-D  肺表面活性蛋白D抗體100 ul

蛋白激酶C(PKC)ELISA試劑盒Spectrin-Alpha  血影蛋白/收縮蛋白抗體100 ul
PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。