產(chǎn)品名稱：高加索酸奶乳桿菌
貨號：YS-01J13379
拉丁文: Lactobacillus kefiri

分離基物: 口服液

提供形式: 凍干物

安全等級: 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: MRS培養(yǎng)基：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸鈉 5.0g，檸檬酸二銨 2.0g，Tween 80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾1.0L，pH6.8

生長條件: 37℃，好氧

存儲條件: 真空冷凍干燥法

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

Beta-lactoglobulin  β-乳球蛋白抗體小鼠膠原酶II

Beta-lactoglobulin  β-乳球蛋白抗體人巨噬來源的趨化因子

Beta-lactoglobulin  β-乳球蛋白抗體大鼠單核趨化蛋白4

Beta-HCG/HCG beta  人β亞基人絨毛膜促性腺激素(β HCG)抗體小鼠膠原酶I

Beta-casein  β-酪蛋白抗體人巨噬集落激因子

Beta-arrestin 1  β-抑制蛋白1抗體小鼠磷酸化蛋白激酶C

beta-Amyloid(35-42)  β淀粉樣肽/Aβ42抗體大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α

beta-Amyloid(31-35)  β淀粉樣肽（31-35）抗體人巨噬抑制因子-1 ELISA 試劑盒

beta-Amyloid(25-35)  β淀粉樣肽（25-35）抗體大鼠鈣調素

beta-Amyloid(1-40)  β淀粉樣肽（1-40）抗體小鼠磷酸化外信號調節(jié)激酶

beta-Amyloid(1-28)  β淀粉樣肽（1-28）抗體人單核趨化蛋白3

beta-Amyloid(1-16) (human)  β淀粉樣肽（1-16）抗體（人）小鼠鈣通道阻滯劑

beta-Amyloid(1-16)  β淀粉樣肽（1-16）抗體大鼠載脂蛋白E

beta-Amyloid 1-40(CT)  β淀粉樣肽1-40(C端)抗體人單核趨化蛋白2

beta-Amyloid 1-40(CT)  β淀粉樣肽 1-40（C端）抗體大鼠網(wǎng)膜素
高加索酸奶乳桿菌規(guī)格芹側耳（杏鮑菇）腦紅蛋白/神經(jīng)血紅蛋白/神經(jīng)球蛋白抗體 D-erythro-Sphingosine, N-Oleoyl- 質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)

解脂亞羅酵母神經(jīng)激肽A抗體 D-erythro-Sphingosine C-20 質量規(guī)格：化學發(fā)光試劑

植物乳桿菌磷酸化膜相關蛋白Numb抗體 L-threo-Sphingosine C-18 質量規(guī)格：含氮量：9.00-10.30 %

松衫暗孔菌磷酸化核有絲分裂器NuMA蛋白抗體 C16 Ceramide (N-Palmitoylsphingosine, D-erythro) 質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

側孢短芽孢桿菌核有絲分裂器NuMA蛋白抗體 L-erythro-Sphingosine (synthetic) 質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)

短芽孢桿菌膜相關蛋白Numb抗體 Azido-erythro-sphingosine 質量規(guī)格：>99.0%(HPLC)(T)

釀膿鏈球菌谷氨酸受體2A抗體 DL-erythro-Dihydrosphingosine 質量規(guī)格：>97.0%(HPLC)(N)

茄鏈格孢磷酸化谷氨酸受體2B抗體 D-erythro-Dihydro-D-sphingosine-1-phosphate 質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N)
微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。