客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
自身免疫調(diào)節(jié)因子(AIRE)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　假單胞菌　5ml

心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　黃硬皮馬勃　1g

絨毛膜促性腺激素α肽(CGα)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　粉紅單端孢霉　250mg

刺猬因子相互作用蛋白(HHIP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　光帽傘　1g

糖基化脂酰肌醇特異性脂酶D1(GPLD1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　枯草芽孢桿菌　5g

免疫球蛋白A1(IgA1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　Polyangium fumosum 　1g

免疫球蛋白A2(IgA2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　冷解糖芽孢桿菌　25g

D-氨基酸氧化酶激活因子(DAOA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　普氏菌　5g

無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員5A(WNT5A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　多主葡萄殼菌　25g

Discs大同源物4(DLG4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　釀酒酵母　5g

神經(jīng)調(diào)節(jié)素4(NRG4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　少根根霉　1g

鳥氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶(OCT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　杰丁畢赤酵母　5g

神經(jīng)調(diào)節(jié)素3(NRG3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　1.0 M 二溶液　球孢白僵菌　100ml

無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員5A(WNT5A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　1.0 M 二溶液　污膠鼓菌　25ml

Ⅰ型膠原α1(COL1α1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　1.0 M 二溶液　白色沉積物桿菌　500ml

甘露糖受體C1(MRC1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　根瘤菌　5g

甘露糖受體C1(MRC1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　拜氏醋桿狀菌　25g

胰島素樣蛋白3(INSL3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　貝倫格葡萄座腔菌梨生?；汀?g
桔青霉探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒細(xì)胞色素C氧化酶亞基3抗體Rabbit chicken IgM Whole serum  兔抗雞IgM抗血清300 ul

細(xì)胞色素C氧化酶亞基6B抗體Rabbit dog IgG Whole serum  兔抗狗IgG抗血清300 ul

酸化致癌基因C-Myc抗體Rabbit FITC Whole serum  兔抗熒光素抗血清300 ul

酸化致癌基因C-Myc抗體Rabbit Goat IgG Whole serum  兔抗羊IgG抗血清300 ul

細(xì)胞色素P450 11B1抗體Rabbit Goat IgM Whole serum  兔抗羊IgM抗血清300 ul

環(huán)酸鳥苷抗體Rabbit Guinea IgG Whole serum  兔抗豚鼠IgG抗血清300 ul

內(nèi)皮因子維生素B12受體抗體Rabbit Guinea IgM Whole serum  兔抗豚鼠IgM抗血清100 ul

原癌基因cMAF抗體Rabbit horse IgG Whole serum  兔抗馬IgG抗血清300 ul

18號(hào)染色體開放閱讀框56抗體Rabbit HRP Whole serum  兔抗HRP抗血清100 ul
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。