熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 耳念珠菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Candida auris | 貨號 | YSP96502 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:1.5 mol/L HNO3)Di-Methyl-Histone H3 (Lys36) (C75H12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)異戊酸甲酯 鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:1.0 mol/L HNO3)Di-Methyl-Histone H3 (Lys36) (C75H12) Rabbit mAb (PE Conjuga)1-哌啶酸 鈹標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體:1.5 mol/L HNO3)ALKBH7 AntibodyFmoc-L-吖丁啶羧酸 銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000mg/l,溶劑:1%硫酸)CD40 Ligand (D5J9Y) Rabbit mAb2-氨基并噻唑-6-甲酸 銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/l,溶劑:1%硫酸)BCL9 Antibody3'-溴酮 鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(三價鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml)Akt3 (E1Z3T) Rabbit mAb2,二氯-5-硝基三氟 鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑:水)TRIM27 (D5S4O) Rabbit mAb溴-2,5-二氟 鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體:水)APC8 (D5O2D) Rabbit mAb喹啉-羧酸 鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體: 5%HCl)NLRP3 (D4D8T) Rabbit mAb乙酰唑 鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體: 1%HNO3)cGAS (D1D3G) Rabbit mAb5-甲基噻唑-2-甲酸 鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100μg/g,基體:K+ 2.2mg/L,Na+ 23mg/L,Ca2+ 39mg/L,Mg2+ 11mg/L,0.5mol/L HNO3)cGAS (D1D3G) Rabbit mAb焦酸鈉十水合物 鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑:1%鹽酸)Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb酮基布洛芬 鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液(100(20℃)µg/mL,基體: 1%HNO3)IRF-4 (D9P5H) Rabbit mAb5--2-甲酸 鈰標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體:10%HNO3)TREX1 (D8E2O) Rabbit mAb4,5-二氟鄰二甲酸 鏑標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Smac/Diablo (D5S3R) Rabbit mAb異氧基 溴代異辛烷(標(biāo)準(zhǔn)品)β-Tubulin (D2N5G) Rabbit mAb氨基異煙酸 銪標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Phospho-Akt (Ser473) (D9W9U) Mouse mAb (Biotinylad)叔丁氧羰基氨基哌啶 氟離子(F-)標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑:水)YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2-硝基-5-氟甲酸甲酯 耳念珠菌探針法熒光PCR檢測試劑盒波形蛋白(VIM)ELISA試劑盒IL-29/IFNL1 白細(xì)胞介素29抗體100 ul 并殖吸蟲抗體(IgM)ELISA試劑盒IL-31 白細(xì)胞介素31抗體500 ul 并殖吸蟲抗體(IgG)ELISA試劑盒IL-31RA/CRL3 白介素31受體a抗體100 ul 型肝炎病毒(HCV)核心抗原(HCV core Ag)ELISA試劑盒IL-32/NK4 白介素32抗體100 ul 型肝炎IgM(HCV-IgM)ELISA試劑盒IL-33/NFHEV 白介素33抗體100 ul 型肝炎IgG(HCV-IgG)ELISA試劑盒IL-33 白介素33抗體500 ul 酰輔酶A羧化酶β多肽(PCCB)ELISA試劑盒IL-1 Alpha 白介素1α抗體100 ul (ACR)ELISA試劑盒IL-1 Beta/IL-1B 白介素1β抗體100 ul 酮酸脫氫酶E1(PDH E1)ELISA試劑盒IL-2 白介素2抗體(大、)100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |