特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 兔痘病毒探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Rabbit Pox Virus(RPV) | 貨號(hào) | YSP97126 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩?lái)說(shuō),SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái),從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來(lái)也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 Nesprin 3蛋白(Nesp3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 黃桿菌 1g 滑行蛋白γ(TXLNγ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 釀酒酵母 5g POLQ樣蛋白解旋酶(HELQ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 鴨疫里氏桿菌 1g 原鈣黏素24(PCDH24)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 異常漢遜酵母異常變種 25g Talanin蛋白(TALN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 擲孢酵母 5g Twist鄰位子(TWISTNB)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) >98.0%(GC) 卷柄根霉 1g APEX核酸酶2(APEX2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) >98.0%(GC) 枯草芽孢桿菌 5g 二氫二醇脫氫酶(DHDH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 腫痂鏈霉菌 25g 唾液酸轉(zhuǎn)移酶8E(SIAT8E)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 奧氏蜜環(huán)菌 5g Ropporin 1蛋白(ROPN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 克雷伯氏菌 1g Gremlin 2蛋白(GREM2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 黑曲霉 250mg 封閉蛋白23(CLDN23)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 空腸彎曲桿菌 1g Axotrophin蛋白(AXOT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 草鏈霉菌 5g 54kDa核孔蛋白(NUP54)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 粉褐粉孢牛肝菌* 25g Osterix蛋白(OSX)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 空泡極單胞菌 5g 核糖核酸外切酶3(ERI3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 釀酒酵母 1g RAB11家族相互作用蛋白3(RAB11FIP3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 中慢生華癸根瘤菌 5g 脂酶D3(PLD3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 植物乳桿菌 10MG 兔痘病毒探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒橋粒斑蛋白1抗體EBNA-3 (EpsinBarr nuclear gens 3) EB病毒編碼核蛋白-3(抗原)500 ul 橋粒斑蛋白2抗體ECE1(Endothelin Converting Enzyme 1) 內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗原100 ul 多巴受體D5抗體ECE2(Endothelin Converting Enzyme 2) 內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶2抗原1 Kit 脫氧尿嘧啶三酸核苷水解酶抗體ECP(eosinophil cationic proin)mouse rat 嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白抗原1 Kit 多巴受體D3抗體ED-1 (Ectodermal Dysplasia 1) 外胚層發(fā)育不良抗原1 Kit 誘捕受體3抗體rhEGF(rh-Epidermal growth factor) 重組表皮生長(zhǎng)因子500 ul 多巴轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白DAT抗體EGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長(zhǎng)因子抗原()100 ul 誘捕受體2抗體EGFL7(EGF-like domain containing proin 7) 類表皮生長(zhǎng)因子域7抗原1 Kit 腫瘤細(xì)胞調(diào)亡素/死亡受體5抗體Egr-1(Early growth response 1) 早期反應(yīng)基因-1/應(yīng)急反應(yīng)生長(zhǎng)基因1抗原1 Kit |