特別提示：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！ 產品名稱 | 細小病毒19探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Parvovirus B19(PVB19)B19 | 貨號 | YSP97048 |
熒光染料的優(yōu)點：
產品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產物結合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。
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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結合到模板上，探針的結合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題，反應結束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術的缺點：
成本高；
設計難度大；
只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
PCR技術的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系，所以根據(jù)終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
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熒光定量PCR原理：
產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化。而在平臺期，擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系，根據(jù)終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
脂肪酸去飽和酶2(FADS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 75% 多源中間根瘤菌 500mg 脂肪酸去飽和酶1(FADS1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 釀酒酵母 1g 脂肪酸去飽和酶1(FADS1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 無花果曲霉 1g IgA-Fc斷片受體(FcaR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 生癌腸桿菌 5g 谷氨酸脫羧酶樣蛋白1(GADL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 表皮葡萄球菌 100g 腎母細胞瘤蛋白1(WT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 卷枝毛霉 25g 脂肪酸去飽和酶3(FADS3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 類諾卡氏菌屬 5g 谷氨酰胺酰肽環(huán)轉移酶(QPCT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 大腸埃希氏菌(大腸桿菌) 1g 無翅型MMTV整合位點家族成員10A(WNT10A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 寄生曲霉 5g 無翅型MMTV整合位點家族成員7B(WNT7B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 球孢白僵菌 100mg 無翅型MMTV整合位點家族成員7A(WNT7A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽孢桿菌 500mg 無翅型MMTV整合位點家族成員10B(WNT10B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 布氏假單胞菌 100g 整合素關聯(lián)蛋白(IAP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 異?？藵h姆酵母 25g 62kDa核孔蛋白(NUP62)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 青霉 1g 核呼吸因子1(NRF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 西洋參銹腐病菌 25g 沙漠刺猬因子(DHH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 伯頓生絲畢赤酵母 5g 生長停滯DNA損傷可誘導蛋白α(GADD45α)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 煙色曲霉 25g 生長停滯DNA損傷可誘導蛋白α(GADD45α)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 日本曲霉 5g
細小病毒19探針法熒光PCR檢測試劑盒6號染色體開放閱讀框57抗體Rabbit MK IgG 兔抗猴IgG （親和層析純化）300 ul 6號染色體開放閱讀框58抗體Rabbit MK IgM 兔抗猴IgM （親和層析純化）100 ul 6號染色體開放閱讀框62抗體Rabbit mouse IgG 兔抗IgG （親和層析純化）300 ul 6號染色體開放閱讀框70抗體Rabbit mouse IgM 兔抗IgM （親和層析純化）300 ul 6號染色體開放閱讀框72抗體Rabbit mouse IgG1, kappa chain 兔抗IgG1k鏈 （親和層析純化）300 ul 7號染色體開放閱讀框13抗體Rabbit rat IgG 兔抗IgG （親和層析純化）300 ul 7號染色體開放閱讀框29抗體Rabbit rat IgM 兔抗IgM （親和層析純化）100 ul 8號染色體開放閱讀框72抗體Rabbit pig IgG 兔抗豬IgG （親和層析純化）20 ul 7號染色體開放閱讀框30抗體Rabbit Meiiones Unguiculataus Milme-Edwauds 兔抗長爪沙鼠IgG （親和層析純化）300 ul |
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