熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 擠奶工結(jié)節(jié)病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Milker's Nodule Virus(MNV) | 貨號 | YSP96922 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 Calumenin 英文名稱: 鈣腔蛋白 0.1ml Anti-Phospho-CDC42 (Ser71) 酸化細(xì)胞分化周期CDC42蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml 豬酰膽堿(ACh)ELISA試劑盒英文名稱:Porcine acetylcholine,ACH ELISA Kit進(jìn)口/分裝 豬酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒英文名稱:Porcine acetylcholine receptor antibody,AChRab ELISA Kit* 豬孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒英文名稱:Porcine Progesterone,PROG ELISA Kit* 豬載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒英文名稱:Porcine apoprotein A1,apo-A1 ELISA Kit進(jìn)口/分裝 豬載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒英文名稱:Porcine apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit* BRD1 英文名稱: BRD1蛋白抗體 0.2ml Anti-Phospho-RCC1 (Ser11) 酸化染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml PTP/PTPase/CD148(Human protein tyrosine phosphatase) ELISA Kit 人蛋白酪氨酸酸酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-NOS-3/eNOS 一氧化氮合成酶-3抗體(內(nèi)皮型)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml Rhesus antibody Rh IKK alpha/IkappaB kinase KB抑制蛋白激酶α抗體 規(guī)格 0.1ml Human Beta anti-galactan proteins IgG ELISA Kit 人β乳糖蛋白抗體IgG 96T phospho-PRKCQ(Thr538) 英文名稱: 酸化蛋白激酶C theta抗體 0.1ml 血瓊脂平板50塊Blood Agar Plate營養(yǎng)需求較高的細(xì)菌培養(yǎng) SS瓊脂平板10塊SS Agar Plate沙門菌屬和志賀菌屬細(xì)菌的分離培養(yǎng) 伊紅美蘭瓊脂平板10塊EMB Agar Plate腸道革蘭氏陰性菌的分離培養(yǎng) 中國藍(lán)瓊脂平板10塊China Blue Agar Plate 山梨醇麥康凱瓊脂平板10塊Sorbitol Maconkey Agar Plate 麥康凱瓊脂平板50塊MacC Agar Plate大腸菌群及大腸桿菌分離 擠奶工結(jié)節(jié)病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒酸化細(xì)胞周期檢測點激酶2抗體P21/WAF1/CIP1 /FITC 熒光素標(biāo)記p21抗體IgG100 ul 網(wǎng)格蛋白重鏈抗體P27/kip1 /FITC 熒光素標(biāo)記P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑IgG100 ul 透明質(zhì)酸介導(dǎo)細(xì)胞游走受體抗體P27/kip1/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑IgG100 ul 2號染色體開放閱讀框24抗體P38 MAPK/FITC 熒光素標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶p38抗體IgG100 ul 2號染色體開放閱讀框60抗體P38 MAPK/RBITC 紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶p38抗體IgG100 ul 酸化周期素依賴性激酶7抗體P-p38 ERK/MAPK14 /FITC 熒光素標(biāo)記酸化-絲裂原活化蛋白激酶p38抗體IgG100 ul 酸化周期素依賴性激酶9抗體MAPKAP Kinase 2/FITC 熒光素標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體IgG100 ul 酸化細(xì)胞周期檢測點激酶1抗體phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、、兔、馬、犬、豬、牛酸化絲裂原活化蛋白激酶p38抗體IgG100 ul 酸化細(xì)胞周期檢測點激酶1抗體Phospho-MAPKAPK2 (Thr222) /FITC 熒光素標(biāo)記酸化絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體IgG100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |