特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產品名稱 | 蜜蜂球囊菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Ascosphaera apis | 貨號 | YSP96386 |
熒光染料的優(yōu)點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 奧美拉唑 (標準品)C50H80O28氟肉桂 氯唑沙宗C44H70O22鹽酸阿米替林 氯唑沙宗(標準品)C20H24NO4Cl乙基酚 D-氨基葡萄糖鹽酸鹽C25H22O10反式-(1R,2R)-2-氨基環(huán)戊鹽酸鹽 鹽酸氨基葡萄糖(標準品)C36H49NO122-氨基-5-溴-芐氧基吡啶 氟派利多,氟哌利多C30H42O72-甲基-6-三氟 氟派利多,氟哌利多(標準品)C30H40O7氯-7-氮雜吲哚 6-疏基嘌呤/6-巰基嘌呤(一水合物)C30H44O2麥芽糖 撲熱息痛/對乙酰氨基酚C18H36O溴-2-羥基甲 撲熱息痛(標準品)C11H16O2[(2-)氨基] (R)-1-氨基-甲基丁基酸蒎烷二酯三氟醋酸鹽C15H12O5N-甲基-氯哌啶 奧拉帕尼C20H17N3O4羰基-環(huán)丁烷甲酸甲酯 花椒毒素/8-甲氧基補骨脂素/甲氧C30H48O43,5-二氨基三氟甲 花椒毒素/甲氧(標準品)C20H24O12異基三基化膦 奎尼丁C17H11NO45-溴-2-氟嘧啶 單月桂酸甘油酯/甘油一月桂酸酯C19H28O8芐磺酰氯 甘油單油酸酯/單油酸甘油酯C46H54N4O12S2,5-二氯-硝基吡啶 ADP.Na2; 5'-二酸腺苷二鈉/腺苷-5'-二酸二鈉鹽C21H24N2O2·C4H6O6α-萜品 蜜蜂球囊菌探針法熒光PCR檢測試劑盒多巴(DA)ELISA試劑盒CD5 CD5抗體100 ul 端粒酶()ELISA試劑盒CD5L/Api6 CD5L抗體100 ul 毒蕈型乙酰膽受體M2(mAChRM2)自身抗體ELISA試劑盒CD6/TP120 CD6抗體100 ul 毒蕈鹼乙酰膽受體M2(CHRM2)ELISA試劑盒CD54/ICAM-1 細胞間粘附分子-1抗體100 ul 疊氮胸苷(AZT)ELISA試劑盒ICAM-2/CD102 細胞間粘附分子-2抗體20 ul 凋亡誘導因子(AIF)ELISA試劑盒ICAM-3/CD50 細胞間粘附分子-3抗體100 ul 凋亡相關因子配體(FASL)ELISA試劑盒CD55/DAF 衰變加速因子CD55抗體20 ul 凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒CD59 CD59抗體100 ul 抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒CD56/NCAM1 CD56抗體100 ul |