熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開(kāi)了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過(guò)將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過(guò)側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
N,N-二(standard for GC,≥99.5%(GC))Itk (2F12) Mouse mAb溴-甲氧基

十二烷(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-IRS-1 (Ser307) Antibody氧雜環(huán)丁-

四(≥99.5% (GC))Phospho-IRS-1 (Ser307) Antibody(S)-(-)-1,2,3,四氫-異喹啉甲酸芐酯對(duì)甲磺酸鹽

鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液(100mg/L,基體: 5％HNO3)IRS-1 AntibodyN-芐基-吡咯烷

鈹標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,基體:2%HCl)IRS-1 Antibody1-芐基-吡咯烷酮

銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3)CEA/CD66e (CB30) Mouse mAb2,二氯甲酰

銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體:1%HNO3)PathScan® Phospho-Btk (Tyr223) Sandwich ELISA kit3,二甲氧基酮

鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)BSCL2/Seipin (D3W8C) Rabbit mAb2-氯-5-硝基三氟甲

六價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml，溶劑：水)Phospho-IRS-1 (Ser302) Antibody溴-氟甲

鉺標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3)Phospho-IRS-1 (Ser1101) Antibody羥基甲酸乙酯

氟標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00μg/g,基體:0.1MH3BO3,K+2.2mg/L,Na+23mg/L,Ce-37mg/L)Phospho-IRS-1 (Ser1101) Antibody間三氟甲基肉桂酸

金標(biāo)準(zhǔn)溶液(100.0μg/g,基體: 0.5mol/L的HCl溶液)Phospho-IRS-1 (Ser612) Antibody2-肼基-5-溴吡啶

鉿標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)p38 MAPK (D13E1) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)磺酰

銥標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基質(zhì)：2.0mol/L鹽酸)PANK1 (D2W3N) Rabbit mAb4,5-二氟-2-

錳標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000mg/L,溶劑：1%硝酸)Phospho-IRS-1 (Ser636/639) Antibody氯-氟三氟甲

鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體:5%HCl)Phospho-IRS-1 (Ser789) Antibody6-羥基-2-萘甲

汞標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體: 3%HNO3)IRS-1 (59G8) Rabbit mAb乙炔環(huán)己

鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑：1%硝酸)Wnt3a Antibody氨基呋咱-羧酸
雞傳染性貧血病毒探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒NADPH氧化酶1(/MOX1/)ELISA試劑盒phospho-ASK1(Ser967)  酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體20 ul

Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA試劑盒phospho-ASK1(Thr845)  酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體100 ul

N1,N12-二乙?；?ELISA試劑盒Maspin  抑癌基因抗體100 ul

N(ε)羧乙基賴氨酸(CEL)ELISA試劑盒MASP  甘露聚糖結(jié)合凝集素絲氨酸肽酶1抗體100 ul

N -甲基- D -天冬氨酸抗體IgG(NMDA Antibody IgG)ELISA試劑盒MASP2  甘露聚糖結(jié)合凝集素絲氨酸肽酶2抗體100 ul

MYC誘導(dǎo)核抗原(MINA)ELISA試劑盒Matriptase  蛋白裂解酶（一種新的癌基因）抗體100 ul

MAX二聚化蛋白1(MXD1)ELISA試劑盒MBP  髓鞘性蛋白抗體100 ul

MAP酸酶雙特異性酸酶1(DUSP-1)ELISA試劑盒CMV/HCMV PP65/HHV5 PP65  巨細(xì)胞病毒PP65/CMV低基質(zhì)脂蛋白抗體100 ul

L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒HCMV  巨細(xì)胞病毒20 ul