PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 白鱘虹彩病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Shovenose Sturgeon Iridovirus(SSIV) | 貨號 | YSP97195 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 核仁酸蛋白3(NPM3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黃蓋小脆柄菇 5g 軸突蛋白2(NRXN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 90% 芝麻?;汀?g 軸突蛋白3(NRXN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 90% 接骨木鐮孢 5g 神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白2(NXPH2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 雞傷寒沙門氏菌 25g 神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白3(NXPH3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 布氏白僵菌 5g 神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白4(NXPH4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 謝瓦氏曲霉 50mg 泛酸激酶2(PANK2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蘋果鏈格孢 1g 泛酸激酶3(PANK3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 5g 泛酸激酶4(PANK4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 阿布拉鏈霉菌 25g 葡萄糖酸變位酶5(PGM5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 異樣纖維單胞菌 5g 酸甘露糖酶1(PMM2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 瑞士乳桿菌 100g 蛋白O-甘露糖基轉(zhuǎn)移酶2(POMT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 橙色桿菌屬 25g 外周蛋白(PRPH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 貝倫格葡萄座腔菌梨生專化型 500g 過氧化還原酶3(PRDX3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 豌豆根瘤菌 1g 過氧化還原酶4(PRDX4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 氧化節(jié)桿菌 5g 過氧化還原酶6(PRDX6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 細孢毛霉 1g 核糖體結(jié)合糖蛋白Ⅱ(RPN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 植物乳桿菌植物亞種 250mg Clavesin 1蛋白(CLVS1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 吸水鏈霉菌 100g 白鱘虹彩病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體IASPP(inhibitory member of the ASPP family) 腫瘤細胞凋亡ASPP家族的另一個成員(抗原)100 ul 鋅指蛋白521抗體CD54 ICAM-1 (Inrcellular dhesion molecule 1; CD54 gen;) 細胞間粘附分子-1(多肽抗原)100 ul 大腸桿菌埃希桿菌O6抗體(腸致病性大腸桿菌O6)IL-1 Beta(Inrleukin-1 Beta) 白介素1β(白細胞介素-1β)(多肽抗原)100 ul 植物延展素-βIL1RAPL1 (Inrleukin 1 receptor accessory proin-like 1) 白介素受體相關(guān)蛋白樣1前體蛋白(抗原)20 ul 內(nèi)皮素-1抗體IL-6(Inrleukin-6) 白介素6(白細胞介素-6)(多肽抗原)100 ul 絲裂原活化蛋白激酶4抗體IL-10(Inrleukin-10) 白介素10(白細胞介素-10)(抗原)100 ul 埃茲蛋白抗體IL-8 白介素8(白細胞介素-8)(抗原)100 ul 細胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體Insulin Receptor(ISR) 胰島素受體(抗原)100 ul 內(nèi)皮素-1單克隆抗體Ingrin Alpha 4/ITGA4(Ingrin alpha 4) 整合素-α(抗原)100 ul |