特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 生孢梭菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Clostridium sporogenes | 貨號 | YSP96568 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 2,二甲酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-PLCγ1 (Tyr783) AntibodyBOC-L-異亮氨酸 2,5-二甲酚標(biāo)準(zhǔn)溶液(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.8%)Phospho-PLCγ1 (Tyr783) Antibody氧化釹 2,6-二叔丁基對甲酚(BHT)(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.7%(GC))Phospho-PLCγ1 (Tyr783) Antibody氧化鎳 4,4'-二氨基二(ODA)(標(biāo)準(zhǔn)品)PLCγ1 Antibody釓雙銨 鄰二甲酸二癸酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析)MEP50 Antibody2-羥基吡啶-N-氧化物 2,二氯甲(標(biāo)準(zhǔn)品)SET7/SET9 (C24B1) Rabbit mAb溴乙酰乙酸乙酯 二十二烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb沸石 二溴(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%)Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb蒙脫石 1,2-二溴標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 mg/l溶于甲)Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb-2- 正癸烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8%(GC))MEP50 (P328) Antibody酸三異丁酯 1,1-二氯乙烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析,≥99.7%(GC))PTMScan® Phospho-Ser/Thr-Pro Motif [p(S/T)P] KitL-纈氨酸叔丁酯鹽酸鹽 2,二硝標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)CD3 (17A2) Rat mAb (PE Conjuga)3,4,5-三氟甲 2,二硝標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/ml,基體:甲)Phospho-cPLA2 (Ser505) AntibodyN'-(*基)-L-天冬酰 2,二硝(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析)cPLA2 AntibodyN-Boc-N'-*基-L-谷氨酰 鄰二甲酸二異癸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)NeuroD Antibody奧氮平 2,二(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)(2S,4R)-氨基吡咯烷-1,2-二甲酸 1-叔丁酯 2,2-二甲基丁烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC))Neurofilament-L (DA2) Mouse mAb聚合氯化鋁 2,二甲基丁烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC))Neurofilament-L (DA2) Mouse mAb5-硝基間二甲酸二甲酯 生孢梭菌探針法熒光PCR檢測試劑盒犬CC趨化因子受體2(CCR2)ELISA試劑盒Ntn1 軸突導(dǎo)向因子1抗體100 ul 犬B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒Nur77/GFRP 孤兒核受體蛋白Nur77抗體100 ul 犬B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒Phospho-Nur77 (Ser351) 酸化孤兒核受體蛋白Nur77抗體100 ul 犬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒NuMA 核有絲分裂器NuMA蛋白抗體100 ul 犬5羥色(5-HT)ELISA試劑盒Phospho-NuMA (Ser395) 酸化核有絲分裂器NuMA蛋白抗體100 ul 犬Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試劑盒NUMB 膜相關(guān)蛋白Numb抗體100 ul 犬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒Phospho-Numb (Ser276) 酸化膜相關(guān)蛋白Numb抗體20 ul 犬25羥基維生素D3(25 HVD3)ELISA試劑盒Nurr1 核受體相關(guān)因子-1抗體100 ul 犬2,3-二酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA試劑盒OAS1 寡腺苷酸合成酶-1100 ul |