熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 雞胚致死孤兒病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Chicken Embro Lethal Orphan Virus(CELOV) | 貨號 | YSP96534 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 四氯間二(98%)FastScan™ Total Rb ELISA KitN-Boc-基哌啶 百菌清標準溶液(100μg/ml,u=4% ,,溶劑:石油)Chk1 (2G1D5) Mouse mAb2-萘硫 滅蠅標準溶液(10μg/ml,u=2%)Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb2-甲基-1,環(huán)戊二酮 霜脲(標準品)Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb2-氟-5-溴吡啶 順式氯菊酯(標準品)ASC (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) (Alexa Fluor® 647 Conjuga)乙炔 四螨(標準品)His-Tag Antibody氟乙炔 四螨標準溶液(100μg/ml,u=4%)His-Tag Antibody2-氟-甲酸 四螨標準溶液(10μg/ml,u=6%)His-Tag (27E8) Mouse mAb溴-甲酸 萎銹靈(標準品)His-Tag (27E8) Mouse mAb2-溴-甲酸 滅幼脲標準溶液(100μg/ml,u=4%,基質(zhì):酮)HA-Tag (6E2) Mouse mAb甲基-溴甲酸 環(huán)己(Standard for GC,>99.0%(GC))DYKDDDDK Tag Antibody (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody)叔丁基 鄰氯酚標準溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)DYKDDDDK Tag Antibody (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody)1-N-BOC-(溴基)哌啶 鄰氯酚(標準品)Villin-1 (R814) Antibody2-甲基-5-甲酸甲酯 鄰氯酚(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-α-Synuclein (Ser129) (D1R1R) Rabbit mAb2-氨基-6-溴 氯-2-(標準品)Phospho-α-Synuclein (Ser129) (D1R1R) Rabbit mAb二酸單對硝基芐酯 敵草索(標準品)IKKβ (2C8) Rabbit mAb氨基酮鹽酸鹽 1-氯辛烷(標準品)p38α MAPK (7D6) Rabbit mAb順式-羥基-D-脯氨酸鹽酸鹽 二乙三(Standard for GC,>99%(GC))β-Gal (14B7) Mouse mAb溴- 雞胚致死孤兒病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒N-乙?;?絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA試劑盒Amphetamine 丙單克隆抗體()500 ul N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒MEK1/2(MAPKK1) 絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體100 ul N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)ELISA試劑盒MEK2/MAPKK2 絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體20 ul N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cad)ELISA試劑盒MAPKAP Kinase 2 絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體100 ul N端中段骨鈣素(N-MID-OT)ELISA試劑盒Phospho-MAPKAPK2 (Thr222) 酸化絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體100 ul N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒Phospho-MAPKAPK2 (Thr334) 酸化絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體20 ul NOD樣受體(NLR)ELISA試劑盒Matrilin 1 軟骨基質(zhì)蛋白抗體100 ul NET-1 ELISA試劑盒ASK1 細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體100 ul NADPH氧化酶3(NOX3/MOX2)ELISA試劑盒phospho-ASK1(Ser966) 酸化細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |