微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過(guò)0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

產(chǎn)品名稱：拜氏梭菌
貨號(hào)：YS-01J13554
拉丁文: Clostridium beijerinckii

提供形式: 凍干物

安全等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 研究、質(zhì)量控制

培養(yǎng)基: 硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基：酪蛋白胨  15.0g，酵母浸出粉5.0g，葡萄糖5.0g，硫乙醇酸鈉0.5g，L-胱氨酸0.5g，刃天青0.001g，氯化鈉2.5g，pH7.1-7.3

生長(zhǎng)條件: 37℃，厭氧

存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說(shuō)明：

1、安瓿瓶開封：用浸過(guò)75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無(wú)菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過(guò)分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對(duì)菌落計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過(guò)程復(fù)雜，對(duì)平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無(wú)菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無(wú)菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無(wú)菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。

豚鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9) 二甲氧基二甲基硅烷(>97.0%(GC))環(huán)指蛋白9抗體

豚鼠色素上皮衍生因子(PEDF)癸基三氯硅烷(>94.0%(GC))金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（C端）

豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP) 十二烷基三氯硅烷(>97.0%(T))表達(dá)蛋白19A抗體

豚鼠白介素1β(IL-1β)十二烷基三乙氧基硅烷(>93.0%(GC))酸敏感性離子通道蛋白抗體

豚鼠表皮生長(zhǎng)因子(EGF)二乙酰氧基二甲基硅烷(>97.0%(GC)(T))胸腺基質(zhì)淋巴生成素-1抗體

豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)二甲氧基二苯基硅烷(>98.0%(GC))骨架相關(guān)蛋白2抗體

豚鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(NOS3/eNOS) 二甲氧基基硅烷(>98.0%(GC))轉(zhuǎn)錄延伸因子3抗體

豚鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(IFABP)三乙氧基乙基硅烷(>95.0%(GC))腫瘤蛋白p53誘導(dǎo)蛋白8

豚鼠γ干擾素(IFN-γ)三氯己基硅烷(>97.0%(GC))轉(zhuǎn)錄延伸調(diào)節(jié)蛋白1抗體

豚鼠免疫球蛋白G1(IgG1)己(>96.0%(GC))扭轉(zhuǎn)蛋白B抗體

豚鼠免疫球蛋白G2α(IgG2α)十六烷基氧基硅烷(>85.0%(GC))巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白8抗體

豚鼠糖基化磷脂酰肌特異性磷脂酶D1(GPLD1)三氯(甲基)硅烷(>98.0%(GC)(T))味覺受體蛋白家族2亞基7抗體

豚鼠組織蛋白酶D(CTSD)  三乙氧基硅烷(>98.0%(GC))味覺受體蛋白家族2亞基50抗體

豚鼠遲現(xiàn)抗原(VLA) 基)硅烷(>98.0%(GC))扭轉(zhuǎn)原腸胚形成同源蛋白1抗體

豚鼠胃動(dòng)蛋白2(GKN2)三氯十八烷基硅烷(>85.0%(GC))Tuftsin蛋白抗體

豚鼠端粒酶(TE)十八烷基三乙氧基硅烷(>85.0%(GC))跨膜蛋白161A抗體
拜氏梭菌菌種傳代苛求芽胞桿菌ras癌基因家族Rab9蛋白抗體

解葡聚糖微桿菌ras癌基因家族RAB20抗體

紅褐肉座菌Ras樣蛋白A+B抗體

蘋果黑腐皮殼菌Rad51抗體

綠色木霉RNA結(jié)合蛋白片段Y染色體家族蛋白2抗體

黃絮鱗鵝膏菌RNA結(jié)合蛋白片段Y染色體家族蛋白1抗體

茄勞爾氏菌RNA聚合酶III抗體

無(wú)花果曲霉變種磷酸化原癌基因c-Met相關(guān)酪氨酸激酶抗體