微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

產(chǎn)品名稱：尖鐮孢萎蔫專化型 斜面
貨號：YS-01J13282
拉丁文: Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum

提供形式: 試管斜面

安全等級: 1

模式菌株: no

應用領域: 棉花枯萎病菌

培養(yǎng)基: 綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL，備用。

生長條件: 24-28℃，好氧

存儲條件: 4℃，避光冷藏

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。

DEK  DEK癌基因結(jié)合蛋白胰十二指腸同源異型盒基因抗原

DEGS1  退行性精母同源物1抗體果膠酶抗原

Defensin β2/DEFB2/HBD-2  防御素β2抗體肝癌高表達基因抗原

Defensin β2  防御素β2抗體腦啡肽

Defensin β1  防御素β1抗體腸道肽轉(zhuǎn)運蛋白2/小肽轉(zhuǎn)運蛋白2抗原

Defensin β1  防御素β1抗體蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗原

Defensin alpha 4  防御素α4抗體纖維束蛋白同源物1/肌動蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗原

DEF1/α Defensin 1/3  防御素α1/3抗體胃蛋白酶原C蛋白抗原

DEDD2  死亡效應結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗原

DEDD1  死亡效應結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體顆粒蛋白前體抗原

DECTIN-1/CLECSF12/beta Glucan Receptor  β葡聚糖受體抗體抑制素/腫瘤抑制因子抗原

DECTIN 2  C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族6成員A抗體蛋白激酶A(多肽)

DECR1  線粒體2,4-雙烯酰輔酶A還原酶1抗體尿激酶型纖溶酶原激活因子（多肽）

DEC-205/CD205/Ly75  淋巴抗原75抗體平足蛋白抗原

DEAF1/Deformed Epidermal Autoregulatory Factor 1  畸形表皮自調(diào)節(jié)因子1抗體多囊腎蛋白1抗原
尖鐮孢萎蔫專化型 斜面菌種傳代膠凍樣類芽孢桿菌磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體 2'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)paclitaxel 質(zhì)量規(guī)格：IND

梨生囊殼孢NADH復合體6抗體 3'-p-Hydroxy Paclitaxel 質(zhì)量規(guī)格：高純級,98%

擬可可毛球二孢黑色素瘤相關抗原11抗體 Paclitaxel-d5 質(zhì)量規(guī)格：AR

黑曲霉同源盒基因Msx2抗體 7-epi-Taxol 質(zhì)量規(guī)格：BS(生物染色級)

灰綠犁頭霉磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MARK4抗體 Paclitaxel C 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品

香菇膜型基質(zhì)金屬蛋白酶胞質(zhì)尾結(jié)合蛋白1抗體 2'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)-6α-hydroxy-7-epi-paclitaxel 質(zhì)量規(guī)格：酸堿指示劑

圍小叢殼周期調(diào)節(jié)蛋白P95抗體 N-Debenzoyl-7-paclitaxel 質(zhì)量規(guī)格：CP

蘋果盤二孢自噬微管相關蛋白輕鏈β3抗體 6α,3'-p-Dihydroxy Paclitaxel 質(zhì)量規(guī)格：0.98