熒光定量PCR試劑盒技術：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 恙蟲病東方體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Orientia tsutsugamushi | 貨號 | YSP97023 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
氨基二酸轉氨酶(AADAT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) BR 青銅色小單孢菌 25g 興奮性氨基酸轉運蛋白2(EAAT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 賴氨酸芽胞桿菌屬 25g 鈉/鉀離子轉運ATP酶α2肽(ATP1α2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 巴氏醋桿菌巴氏亞種 5g 鈉/鉀離子轉運ATP酶β1肽(ATP1β1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 25g 鈣離子轉運ATP酶B2(ATP2B2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 硫色小針層孔菌 5g 泛醌細胞色素C還原酶核心蛋白Ⅱ(UQCRC2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 1g RalA結合蛋白1(RALBP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) AR,99% metals basis 草酸青霉 10g 肌動蛋白相關蛋白2/3復合體亞基4(ARPC4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) AR,99% metals basis 香菇 50g 神經(jīng)元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 葡萄座腔菌 1g 神經(jīng)元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 嗜熱液化芽孢桿菌 25g 尿皮質(zhì)素2(UCN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 金耳 5g 解整合素金屬蛋白酶28(ADAM28)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 棒曲霉 100g 尿皮質(zhì)素3(UCN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蓋囊菇 25g 半胱氨酸蛋白酶抑制劑B(CSTB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黑曲霉 5g 信號素7A(SEMA7A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 93% 葡萄座腔菌 1g 肌肽酶1(CNDP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 龜裂鏈霉菌 25g 泛素結合酶E2C(UBE2C)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽胞桿菌 5g Klotho蛋白(KL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98.0 % 金黃殼囊孢 1g
恙蟲病東方體探針法熒光PCR檢測試劑盒胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子抗體Rabbit bovine IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗牛IgG100 ul 半胱酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端)Rabbit bovine IgM/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗牛IgM100 ul CSMD1抗體Rabbit chicken IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗雞IgG100 ul 煙型酰膽受體α4抗體Rabbit chicken IgM/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗雞IgM100 ul 細胞表面趨化因子受體9抗體Rabbit dog IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗狗IgG100 ul 細胞表面趨化因子受體5抗體Rabbit Goat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗羊IgG100 ul 胱抑素C/半胱氨酸蛋白酶抑制劑C抗體Rabbit Goat IgM/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗羊IgM100 ul C-藻藍素/藻藍蛋白/藻青蛋白抗體Rabbit horse IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗馬IgG100 ul 細胞色素P450 1A1抗體Rabbit HRP/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗HRP100 ul |
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