特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 馬隱秘桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Arcanobacterium equi | 貨號 | YSP96380 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 福多斯坦C26H30O72-氯-溴-5-氟吡啶 福多斯坦(標準品)C29H50O3N-[2-(2-羥基乙氧基)-基]乙 利塞膦酸C18H16O7DL-肉鹽酸鹽 利塞膦酸(標準品)C20H16N2O4硝基-三氟酚 利塞膦酸鈉C20H18O87-溴-氯噻酚并[3,2-D]嘧啶 利塞膦酸鈉(標準品)C9H7NO2乙基三丁酮肟基硅烷 甲酸利扎曲普坦;利扎曲坦C18H25NO6N-甲基-2-吡咯甲 甲酸利扎曲普坦;利扎曲普坦(標準品)C14H12O5硫酸卡那霉素 羅庫溴銨C13H10O4氟- 羅紅霉素C9H17NO2-溴-6-氟 羅紅霉素(標準品)C9H10O5O-基羥鹽酸鹽 鹽酸司來吉蘭C32H48O4對乙基乙酮 氮雜雙環(huán)【3.3.0】辛烷鹽酸鹽C15H14O31-(甲氧基-3,5-二基)乙酮 鹽酸舍曲林C18H16O71-(甲氧基基)哌鹽酸鹽 鹽酸舍曲林(標準品)C29H36O6二月桂酸二正辛基錫 7-乙基-10-羥基喜樹(SN-38)C33H40O152-氟-溴-5-甲基吡啶 戊酸鈉C19H14NO4.H2SO4溴-2-硝基吡啶 戊酸鈉(標準品)C57H104O62-氨基-硝基-5-氟吡啶 馬隱秘桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒Phospho-CD18 (Ser756/Thr758/759) 酸化整合素β2抗體400 ul 骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒CD184/CXC-R4 細胞表面趨化因子受體4抗體1 Kit 骨成型蛋白9(BMP-9)ELISA試劑盒CD19 CD19抗體1 Kit 骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒Phospho-CD19 (Tyr531) 酸化CD19抗體100 ul 骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒CD20 CD20抗體100 ul 骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒CD22/BLCAM B淋巴細胞粘附分子CD22抗體50 ml 骨成型蛋白15(BMP-15)ELISA試劑盒CD23/Fc EpsilonR II CD23抗體100 ug 骨保護素(OPG)ELISA試劑盒CD24 CD24抗體10 ml 谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)ELISA試劑盒CD25/IL-2RA 白介素2受體a鏈抗體50 ml |