熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 溶血梭狀芽孢桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Clostridium haemolyticum | 貨號 | YSP96560 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 丁酸乙酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))DYRK1B Antibody2-基-4'-溴甲基聯(lián) 甲基酸乙酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-Zap-70 (Tyr493)/Syk (Tyr526) AntibodyBOC-L-氟氨酸 甲酸乙酯(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Zap-70 (Tyr493)/Syk (Tyr526) Antibody2,6-二甲基-1,二氫-3,5-吡啶二羧酸二乙酯 酸乙酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Zap-70 (99F2) Rabbit mAbCBZ-L-纈氨酸 乙酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))Zap-70 (136F12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)多紫杉 己酸乙酯(Standard for GC,>99%(GC))p70 S6 Kinase (49D7) Rabbit mAb硫代甲酰 棕櫚酸乙酯(standard for GC,≥99%(GC))p70 S6 Kinase (49D7) Rabbit mAb2-甲基--2- 異辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))Zap-70 (L1E5) Mouse mAb甲基丁炔-3 乙(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAbN-Cbz-L-蛋氨酸 乙二二乙(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb(S)-(+)-間磺酸縮水甘油酯 乙二二甲(standard for GC,≥99.5%(GC),含0.01% BHT穩(wěn)定劑)Phospho-Syk (Tyr525/526) Antibody羥基酮 乙二乙乙酸酯(Standard for GC,>99%(GC))BATF (D7C5) Rabbit mAb (PE Conjuga)三異基亞酸酯 戊酸乙酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Syk Antibody2-溴-7-羥基萘 乙酸乙酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))Syk Antibody乙酸甲酯 2-甲基四(MeTHF)(Standard for GC,≥99.5%(GC))SimpleChIP® Human GLA Promor Primers2-氯-氟甲 異戊烷(Standard for GC,≥99.7%(GC))Lck (V49) Antibody四氯二甲酸酐 酸甲酯(MA)(Standard for GC,>99%(GC))Phospho-Syk (Tyr323) Antibody槲皮素 丁酸甲酯(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Syk (Tyr323) Antibody(N-Boc-氨甲基)甲酸 溶血梭狀芽孢桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)ELISA試劑盒NKB 神經(jīng)激肽B抗體100 ul 15-羥基脫氫酶(15-PGDH)ELISA試劑盒NKG2A NK細(xì)胞受體2A抗體100 ul 15-epi-氧脂素 A4(15-epi-LXA4)ELISA試劑盒NKG2C NK細(xì)胞受體2C抗體100 ul 14-3-3 蛋白 beta/alpha(YWHAB)ELISA試劑盒NKG2D/CD314 NK細(xì)胞受體2D抗體300 ul 12-脂氧化酶/脂加氧酶(LOX-12)ELISA試劑盒NKR(Neuromedin B Receptor) 神經(jīng)激肽B受體抗體100 ul 12羥二十烷四酸(12-HE)ELISA試劑盒NKR/Neurokin B receptor 神經(jīng)激肽B受體抗體100 ul 11-脫氧皮質(zhì)ELISA試劑盒Nm23 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因抗體10 mg 11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試劑盒Nm23-H1 腫瘤抑制基因抗體100 ul 11β羥類固脫氫酶1型(11β-HSD1)ELISA試劑盒Nm23-H2 腫瘤抑制基因抗體20 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |