特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 禾谷鐮刀菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Fusarium graminearum | 貨號 | YSP96736 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 紅景天苷Ribosomal Proin L26 (D8F6) Rabbit mAb酸二芐酯 葒草苷(標(biāo)準(zhǔn)品)EGF Receptor (E746-A750del Specific) (D6B6) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)5-氯噻吩-2-酸 XAV-939;NVP-XAV 939Rpb1 CTD Antibody Sampler Kit2,二氯磺酰氯 胡黃連苷I(標(biāo)準(zhǔn)品)C17orf59 (D2B5X) Rabbit mAb依澤替米貝 胡黃連苷 II(標(biāo)準(zhǔn)品)PI3 Kinase p110γ (D55D5) Rabbit mAb對乙基甲酰氯 胡黃連苷 III(標(biāo)準(zhǔn)品)PI3 Kinase p110γ (D55D5) Rabbit mAb1,丁磺酸內(nèi)酯 胡蘿卜苷(標(biāo)準(zhǔn)品)p300 (D2X6N) Rabbit mAb3,4,5-三氟 β-胡蘿卜素(標(biāo)準(zhǔn)品)ZO-1 Antibody甲基酸乙酯 胡麻屬苷(標(biāo)準(zhǔn)品)PhosphoPlus® RIP3 (Ser227) Antibody Duet四正丁基銨 二氟代三基硅酸鹽 葫蘆巴鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)Lamin A/C (4C11) Mouse mAb (Biotinylad)2-酸 葫蘆素B(標(biāo)準(zhǔn)品)Acetyl-Histone H2B (Lys12) Antibody(溴基)酸 槲皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品)PFKP Antibody2,7-二溴芴 槲皮素-7-O-葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)ALDH1A1 (D9Q8E) XP®Rabbit mAb(基)酸 花椒毒酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Mouse Basic Fibroblast Growth Factor (mFGF basic/FGF2)硝酸釹六水合物 槐果(標(biāo)準(zhǔn)品)Mouse Basic Fibroblast Growth Factor (mFGF basic/FGF2)氨基-溴吡唑 環(huán)氧澤瀉(標(biāo)準(zhǔn)品)Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control2,4,5-三氟甲 黃柏(標(biāo)準(zhǔn)品)FastScan™ Phospho-p70 S6 Kinase (Thr389) ELISA Kit2-氟-6-氯嘌呤 黃柏酮(標(biāo)準(zhǔn)品)DDB-2 (D4C4) Rabbit mAb二環(huán)己基氯化膦 禾谷鐮刀菌探針法熒光PCR檢測試劑盒酸化雄激素受體抗體CD68/FITC 熒光素標(biāo)記CD68抗體IgG100 ul 酸化雄激素受體抗體CD69/CLEC2C/AIM/FITC 熒光素標(biāo)記活化誘導(dǎo)分子CD69抗體IgG100 ul 酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗體CD73/FITC 熒光素標(biāo)記胞漿-5´-核苷酸酶-Ⅱ抗體IgG100 ul 酸化蛋白激酶B抗體CD79A/IGBP-1 /FITC 熒光素標(biāo)記免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1抗體IgG100 ul 酸化活化復(fù)制因子2抗體B7-1/CD80 /FITC 熒光素標(biāo)記抗刺激分子B7-1蛋白抗體IgG100 ul 凋亡相關(guān)蛋白3抗體CD80/B7-1/FITC 熒光素標(biāo)記刺激分子B7-1蛋白抗體IgG100 ul 自噬相關(guān)蛋白18抗體CD82/KAI1/FITC 熒光素標(biāo)記腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1抗體IgG20 ul 自噬相關(guān)蛋白4A抗體CD83/Cell surface proin HB15/FITC 熒光素標(biāo)記CD83抗體IgG100 ul 載脂蛋白A4抗體CD84/SLAMF5/FITC 熒光素標(biāo)記CD84抗體IgG100 ul |