熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 卵形瘧原蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Plasmodium ovale | 貨號 | YSP97078 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 衰老關(guān)鍵蛋白2(FBLN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 小紅酵母 250mg 外周蛋白(PRPH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 香栓菌 100g 芳烴受體抑制因子(AHRR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 少根根霉原變種 25g Slit同源物1(Slit1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 芽孢桿菌 500g SRC/FGR/YES相關(guān)FYN癌基因(FYN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 25mg 酸肌醇-3-激酶催化亞基β肽(PIK3Cβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 少根根霉 1g 血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蟲草 5g 轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 黃曲霉 1g 甲狀旁腺激素(PTH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 松果鏈霉菌 250mg 垂體腫瘤轉(zhuǎn)化1相互作用蛋白(PTTG1IP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黑馬朗假絲酵母 10g 白介素2受體α(IL2Rα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 大腸埃希氏菌 100g 載脂蛋白F(APOF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 間型假絲酵母 25g 5羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白(SERT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 雷丸菌 500g 全細胞色素C合酶(HCCS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種 1g 谷氨酸脫羧酶1(GAD1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽孢桿菌 5g Cerberus蛋白(CER)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 石楠炭疽病菌 1g 谷氨酰胺合成酶(GS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 白假絲酵母 250mg cGMP依賴性蛋白激酶Ⅰ(PRKG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蠟樣芽胞桿菌 5g 卵形瘧原蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒21號染色體開放閱讀框69抗體Ingrin AlphaV (Ingrin alpha V) 巨噬細胞來源的趨化因子αV抗原100 ul 細胞周期相關(guān)激酶抗體CREB-1 (cAMP responsive element binding proin-1) 環(huán)腺苷酸應答元件結(jié)合蛋白(抗原)300 ul 癌相關(guān)抗原抗體phospho-CREB-1 酸化環(huán)腺苷酸應答元件結(jié)合蛋白(多肽)100 ul 半胱酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端)ADRA2 peptide 腎上腺素能受體2抗原300 ul 周期素依賴性激酶3抗體CRF (Corticotropin-Releasing Factor) 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子100 ul 鈣調(diào)酸酶抗體CT (Calcitonin ) 降鈣素(抗原)100 ul 鈣蛋白酶1抗體CT-R (Calcitonin receptor) 降鈣素受體(抗原)500 ul 鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體Cytochrome C 細胞色素 C(抗原)100 ul 半胱酸蛋白酶蛋白-6抗體(C端)ADRB3/ Beta3-AR ( Beta3-adrenergic receptor) 腎上腺素能受體β3100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |