特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 革蜱探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Dermacenter spp. | 貨號 | YSP96616 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 鳥嘌呤鹽酸鹽EHMT1 (E6Q8B) Rabbit mAb嘧啶甲酸 鳥嘌呤硫酸鹽SignalSilence® cdc2 siRNA I(S)-1-N-BOC-哌甲酸甲酯 腺嘌呤鹽酸鹽PDI (C81H6) Rabbit mAb嘧啶-2-羧酸 肌苷;次核苷PDI (C81H6) Rabbit mAb2-氟-甲酸 肌苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Cortactin Antibody二并[b,f][1,4]硫氮雜卓-11-[10H]酮 5‘-腺嘌呤核苷酸二鈉鹽(AMP2Na)ATF-2 (D4L2X) XP® Rabbit mAb硝基鄰二甲 5‘-腺嘌呤核苷酸二鈉鹽(AMP2Na)ATF-2 (D4L2X) XP® Rabbit mAb2-氨基嘧啶-5-羧酸 5-溴-2’-脫氧尿苷(BRDU)Cortactin (H222) Antibody(氯甲基)甲酸 胞苷;胞嘧啶核苷TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb環(huán)己基異酸酯 胞嘧啶核苷,胞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb(3aR,4S,5R,6aS)-(-)-六氫-(羥甲基)-2-氧代-2H-環(huán)戊并[b]呋喃-5-基 1,1'-聯(lián)-甲酸酯 dATP,三酸脫氧腺苷鈉鹽AUP1 (D5M9Q) Rabbit mAb反式-(1R,2R)-2-氨基環(huán)戊鹽酸鹽 dGTP;三酸脫氧鳥苷鈉鹽Asymmetric-Methyl-PABP1 (Arg455/Arg460) (C60A10) Rabbit mAb二甲氨基-1- dCTP;三酸脫氧胞苷鈉鹽Phospho-NDRG1 (Ser330) Antibody硅烷偶聯(lián)劑 JH-M902 dTTP;2‘-脫氧胸苷-5’三酸鈉鹽(dTTP)Sav1 AntibodyL-氨 2‘-脫氧尿苷Brg1 (A52) Antibody2-氨基噻吩-甲酸乙酯 β-胸苷(dT);2'-脫氧胸苷Brg1 (A52) Antibody2-溴丁酸甲酯 2’-脫氧鳥苷;2'-dGPhospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb (Sepharose®Bead Conjuga)5,6-二氨基脲嘧啶 2‘-脫氧胞苷Phospho-Connexin 43 (Ser368) Antibody溴-2-三氟甲酸 革蜱探針法熒光PCR檢測試劑盒骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒SATB1 核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體20 ul 骨特異性性酸酶B(ALP-B)ELISA試劑盒Phospho-SATB1 (Ser47) 酸化核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體100 ul 骨特性性酸酶C端肽ELISA試劑盒SCF 干細(xì)胞生長因子抗體100 ul 骨橋素(OPN)ELISA試劑盒SCG3/SgIII 分泌粒蛋白3抗體100 ul 骨性酸酶(BALP)ELISA試劑盒SCN1A SCN1A抗體100 ul 骨鈣素(OT)ELISA試劑盒SCN2A SCN2A抗體20 ul 骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒SCN9A/NAV1.7 電壓開啟的鈉離子通道SCN9A抗體500 ul 骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒SCP2/NLTP 固醇攜帶蛋白2抗體100 ul 骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒SCP3 聯(lián)會復(fù)合體蛋白3抗體100 ul |