PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 產品名稱 | 柯拉松血吸蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Schistosoma curassoni | 貨號 | YSP97179 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 葡萄糖轉運蛋白7(GLUT7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 釀酒酵母 1g 葡萄糖轉運蛋白14(GLUT14)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% Phoma medicaginis var. medicaginis 250mg 葡萄糖轉運蛋白5(GLUT5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 松乳菇 5g 葡萄糖轉運蛋白6(GLUT6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 黃蓋蜜環(huán)菌 1g 葡萄糖轉運蛋白9(GLUT9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 粉狀畢赤氏酵母 250mg 葡萄糖轉運蛋白8(GLUT8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黑絡丸 25g 鈉鉀協(xié)同轉運蛋白1(NKCC1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 5g 陰離子/糖轉運蛋白(AST)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 1.00mg/ml 枯草芽孢桿菌 1g 鈉/葡萄糖協(xié)同轉運蛋白1(SGLT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 平臍蠕孢菌 100g 鈉/葡萄糖協(xié)同轉運蛋白2(SGLT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 根瘤菌 25g X-轉運蛋白3(Xtrp3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽孢桿菌 1g 甘氨酸轉運蛋白2(GLYT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 越南芽孢桿菌 5g 牛磺酸轉運蛋白(TAUT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98.0%(HPLC) 釀酒酵母 25g X-轉運蛋白2(Xtrp2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98.0%(HPLC) Gordonia 5g 甘氨酸轉運蛋白1(GLYT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 膠韌革菌(榆耳,榆蘑) 100ml 葉酸轉運蛋白(FOLT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 異常漢遜酵母 25ml 尿酸鹽轉運蛋白1(URAT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 聚多曲霉 5g 線粒體鐵蛋白(MFRN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 矩圓黑盤孢 1g 柯拉松血吸蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒轉錄接頭蛋白EP300抗體TNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced proin 1) 腫瘤壞死因子α誘導蛋白1抗原100 ul 內皮脂肪酶抗體TP53(tumor proin p53; Li-Fraumeni syndrome) 抗腫瘤P53抗原100 ul MYC啟動子結合蛋白1抗體TP I (topoisomerase I ) 拓普西異構酶Ⅰ抗原100 ul 內質網蛋白29抗體TOPO II Alpha/DNA TP II Alpha (DNA topoisomerase II Alpha) DNA拓普西異構酶Ⅱ抗原20 ul 脂酰輔酶A水解酶抗體TPH (Trptophan Hydroxylase) 色氨酸羥化酶(多肽)1 Kit 酸化4E結合蛋白1抗體TRA16 (sticular orphan nuclear receptor-4 (TR4)-associad proin) 激素受體相關蛋白/孤兒素受體相關蛋白(抗原)100 ul 三羥酰輔酶A脫氫酶抗體TRADD(TNF receptor 1 associad via death domain) 有死亡區(qū)的腫瘤壞死因子受體1相關蛋白抗原1 Kit 限制過度增殖相關蛋白EML4抗體TRAF1 腫瘤壞死因子受體相關因子1抗原1 Kit ETS1相關蛋白2抗體TRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associad factor 2) 腫瘤壞死因子受體相關因子2抗原1 Kit |