熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 馬克洛菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Crossiella equi | 貨號 | YSP96595 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 α-巰基甘油(>98.0%(GC)(T))β-Amyloid (1-43 Preferred) (E8C2D) Rabbit mAb六氟酸鈉 二乙(>99.0%(GC))Mic-1 (L300) Antibody4,6-二氯-5-氟嘧啶 甲(>99.0%(GC))Phospho-Etk (Tyr40) Antibody2-氯-6-甲酸 2-基正辛(>98.0%(GC))CD45 (HI30) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjuga)(S)-(-)-2-羧基環(huán)丁 氨基-羥基甲酸(>97.0%(HPLC)(T))AP-2α (C83E10) Rabbit mAb正己基鋰 反-2-[(叔丁基基)-2-甲基-2-亞基]二(>98.0%(HPLC)(N))Dvl2 Antibody2-二環(huán)己膦基-2'-(N,N-二)-聯(lián) α-基-羥基肉桂酸(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-NDRG1 (Thr346) Antibody氯-甲 3,5-二甲氧基-羥基肉桂酸(>99.0%(GC)(T))CD45 (D9M8I) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjuga)2'-乙酮 2,5-二羥基甲酸(>99.0%(GC)(T))Dvl3 Antibody2,3,三羥基甲 4'-羥基偶氮-2-羧酸(>98.0%(HPLC)(T))Dvl3 Antibody2-乙酰-5-溴吡啶 羥基-2-吡啶甲酸(>98.0%(T))TRAIL (C92B9) Rabbit mAb3,5-二甲氧基甲酸甲酯 4'-羥基偶氮基-羧酸水合物(>98.0%(HPLC)(T))Ret Antibody2,5-二羥基甲酸甲酯 吲哚酸(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-Ret (Tyr905) Antibody2-氯-5-羥甲基吡啶 2',4',6'-三羥基乙酮一水合物(>98.0%(GC))Ret (C31B4) Rabbit mAb乙基酸 2-氨基甲酰(>98.0%(HPLC)(T))Dvl2 (30D2) Rabbit mAb乙酰氨基磺酰疊氮 羧氧基半鹽酸鹽(>98.0%(T))Dvl2 (30D2) Rabbit mAb溴-2-氟磺酰氯 2-氟-1-甲基吡啶鎓對甲磺酸鹽(>98.0%(T))TAB1 (C25E9) Rabbit mAb氧雜環(huán)丁 1-(5-氟-2,二基)-甲基哌(>98.0%(HPLC)(T))GβL Antibody羧基噠 馬克洛菌探針法熒光PCR檢測試劑盒雞H5型病毒(H5N1)抗體(IgG)ELISA試劑盒PLGF/PIGF (human) 胎盤生長相關(guān)抗體()100 ul 雞G0/G1期開關(guān)基因(G0S2)ELISA試劑盒PLGF/PIGF (mouse, rat, pig) 胎盤生長因子抗體(、、豬)100 ul 雞FAM172A蛋白(FAM172A)ELISA試劑盒PLGF 胎盤生長因子抗體20 ul 雞C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒PLK1/STPK13 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體100 ul 雞CD8分子(CD8)ELISA試劑盒Phospho-PLK1 (Thr210) 酸化絲/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體100 ul 雞CD4分子(CD4)ELISA試劑盒Phospho-PLK1 (Ser137) 酸化絲/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體100 ul 雞CD3分子(CD3)ELISA試劑盒PMP22 外周髓鞘蛋白-22抗體100 ul 雞B因子(BF)ELISA試劑盒PMS2 腫瘤錯配修復(fù)基因PMS2抗體100 ul 雞5羥色/血清素/血清(5HT/ST)ELISA試劑盒PNAT/NAT2 N-乙?;D(zhuǎn)移酶2抗體100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |