熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 鴨疫里默氏桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Riemerella anatipestifer | 貨號 | YSP97147 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 朊病毒蛋白(PRNP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 枯草芽孢桿菌 5g 血型糖蛋白A(GYPA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 加德那氏鏈霉菌 1g 血型糖蛋白C(GYPC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 鏈霉菌 5g 血型糖蛋白B(GYPB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 綠梭鏈孢 100g Kell蛋白(KEL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 束紅球菌 25g SHC-轉(zhuǎn)化蛋白2(SHC2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 墨汁鬼傘 5g 卷曲同源物4(FZD4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 棗生梅奇酵母 1g 卷曲同源物9(FZD9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 水生黃桿菌 25g 卷曲同源物10(FZD10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 大腸埃希菌 5g 基質(zhì)金屬蛋白酶17(MMP17)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 產(chǎn)黃青霉 25g 基質(zhì)金屬蛋白酶19(MMP19)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 繩生毛殼菌 5g 基質(zhì)金屬蛋白酶20(MMP20)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 瓊氏不動桿菌 25ml 基質(zhì)金屬蛋白酶21(MMP21)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% Aurantimonas sp. 5ml 基質(zhì)金屬蛋白酶24(MMP24)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 層臥孔菌 25g 白介素7受體(IL7R)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 釀酒酵母 5g 白介素28受體(IL28R)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 乳白蘑菇 50mg 膽堿酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 聚多曲霉 1g 基質(zhì)金屬蛋白酶27(MMP27)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 芽孢桿菌 5g 鴨疫里默氏桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒酸化DNA依賴性蛋白激酶抗體IL-7Ra/CD127 peptide 白細(xì)胞介素-7受體a抗原1 Kit 蓬亂蛋白2抗體ING1/p33(inhibitor of growth gene 1) 生長抑制因子基因1抗原100 ul 防御素α5抗體Inhibin Alpha 抑制素α抗原100 ul 鋅離子結(jié)合蛋白DTX2抗體Inhibin beta A peptide 抑制素beta A抗原1 Kit EYA3蛋白抗體Inhibin beta B 抑制素βB抗原1 Kit 刺痛感蛋白抗體Ingrin Alpha3 整合素α3抗原500 ul 翻譯延伸因子EF-1 α2抗體Ingrin Beta5 整合素β5抗原1 Kit 延伸因子EF-1δ抗體Ingrin alpha 1 整合素α1抗原1 Kit 延伸因子EF-1 γ抗體Ingrin Alpha4 Beta7/LPAM-1 (Lymphocy Peyer’s patch Adhesion Molecule 1/Ingrin alpha4,beta7) 整合素α4β7抗原300 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 |