PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 南非諾卡菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Nocardia transvalensis | 貨號 | YSP97014 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 脂轉(zhuǎn)運蛋白(PLTP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 花腐鐮孢 1g
激肽釋放酶2(KLK2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 巴氏醋桿菌 25g 抗神經(jīng)節(jié)苷脂M1抗體(Anti-GM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 柱孢犁頭霉 5g 血清淀粉樣P物質(zhì)(SAP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 新城疫病毒 100mg 谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶μ2(GSTμ2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 球孢白僵菌 25mg 谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α4(GSTα4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 密褐褶菌 500mg 成肌分化蛋白(MyoD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 高盧蜜環(huán)菌 25ml Smad同源物3(Smad3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 韓芝 100mg 膜聯(lián)蛋白A11(ANXA11)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 楚氏喜鹽芽孢桿菌 500mg 膜聯(lián)蛋白A1(ANXA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 微桿菌 1g 過氧化還原酶5(PRDX5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 外外安德倫茨氏菌 1g 氧化低密度脂蛋白(OxLDL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 樟疫霉 5g 橋粒斑蛋白(DSP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 佐貝爾梅奇酵母 100g 血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 異??藵h姆酵母 25g 促卵泡素(FSH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 大腸埃希菌 5g 胃動蛋白1(GKN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 金龜子假絲酵母 25g α2-巨球蛋白(α2M)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 大腸埃希菌 5g 纖維膠凝蛋白1(FCN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% Stenotrophomonas rhizophila (可定) 25g 南非諾卡菌探針法熒光PCR檢測試劑盒CD44抗體CD14/RBITC 紅色羅丹明標記CD14蛋白抗體IgG100µg 白細胞共同抗原抗體NHE1/RBITC 紅色羅丹明標記鈉氫通道蛋白抗體IgG100 ul CD5抗體RAMP-1/RBITC 紅色羅丹明標記受體活性調(diào)制蛋白1抗體IgG100 ul 細胞間粘附分子-1抗體CD86/B7-2/RBITC 紅色羅丹明標記CD86蛋白抗體抗體IgG100 ul 神經(jīng)細胞粘附分子1抗體AT1R/RBITC 紅色羅丹明標記血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體IgG100 ul L選擇素抗體AT1R/AGTR1/FITC 熒光素標記血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體IgG100 ul CD68抗體CD93/C1qrp/FITC 熒光素標記CD93抗體IgG100 ul 6號染色體開放閱讀框226抗體CD94/KLRD1/FITC 熒光素標記NK細胞表面抑制性受體CD94抗體IgG20 ul 間隙連接蛋白30抗體CD97/FITC 熒光素標記CD97抗體IgG100 ul |