PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 鮭魚立克次氏體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Piscirickettsia salmonis | 貨號 | YSP97073 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族M成員6(TRPM6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 云南球蓋菇 250mg
轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族M成員7(TRPM7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 騷動厄氏菌 5g 轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族V成員1(TRPV1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% Sphingomonas phyllosphaerae 1g 色胺酸羥化酶2(TPH2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 球孢白僵菌 250mg RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止因子Ⅰ(TTF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 美澳型核果褐腐病菌 5g Podocan蛋白(PODN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 麗齒菌屬 100g 生長因子受體結(jié)合蛋白10(Grb10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 美澳型核果褐腐病菌 25g 胰島素樣生長因子2-mRNA結(jié)合蛋白3(IGF2BP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黑曲霉 1g 黏病毒耐藥蛋白1(MX1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 溶血性曼氏桿菌 5g 酶原粒蛋白16同源物B(ZG16B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種 100g 甘露糖受體C1樣蛋白1(MRC1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 25g 糖蛋白Ⅴ(GP5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 波氏假阿利什菌 5g 白介素10受體α(IL10Rα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 果生鏈核盤菌 1g 白介素10受體β(IL10Rβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 裂褶菌 250mg 巢蛋白(NID)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 香菇(L26) 25MG 靜止素Q6硫基氧化酶1(QSOX1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 鏈格孢(可定) 250mg 連接橋粒斑珠蛋白(JUP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 亮白曲霉 5mg 抗增生抗體靶分子1(TAPA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 肉色迷孔菌(可訂) 10mg 鮭魚立克次氏體探針法熒光PCR檢測試劑盒胞漿-5´-核苷酸酶-Ⅱ抗體BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子)(多肽片斷抗原)1 Kit CD86抗體ACA11 peptide 擬南芥ACA11蛋白多肽抗原100 ul 周期素依賴性激酶1抗體AHA3 peptide 植物蛋白AHA3抗原(擬南芥)20 ul 周期素依賴性激酶2抗體bFGF 性成纖維細胞生長因子(多肽抗原)300 ul 周期素依賴性激酶4抗體ACE2(Angionsin converting enzyme 2) 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗原100 ul 周期素依賴性激酶5抗體BNP 腦鈉素(多肽抗原)100 ul 1號染色體開放閱讀框200抗體BrdU (Bromodeoxyuridine) 溴脫氧尿苷300 ul 6號染色體開放閱讀框223抗體C5 過敏毒素C5(補體C5)抗原300 ul 纖維素酶抗體CA125 (Ovarian cancer gen) 卵巢癌抗原(抗原)300 ul |