樣品RNA的抽提：
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 反芻獸考德里氏體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Cowdria ruminantium | 貨號 | YSP96591 |
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
四甲基硅烷[>99.0%(GC),用于核磁共振]Phospho-M-CSF Receptor (Tyr809) Antibody氨基-2-甲氧基吡啶 (*基硅基)-1-磺酸鈉(>98.0%(T))Phospho-M-CSF Receptor (Tyr723) (49C10) Rabbit mAb2-溴-5-代 三氟化-乙絡(luò)合物(>98.0%(W))Progesrone Receptor B (C1A2) Rabbit mAb芐氧基吲哚 二甲基硒(>98.0%(GC))IFN-γ (3F1E3) Mouse mAb甲基三乙氧基硅烷 六氟(>99.0%(GC))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr751) Antibody溴-3,5-二氟 四甲基錫(>96.0%(GC))PDGF Receptor β Antibody3,二甲氧基酚 二氯二茂鋯(>97.0%(T))PDGF Receptor α Antibody1,2,三氯-5- Chirabi-AR[用于核磁共振]cGAS (D3O8O) Rabbit mAb (Mouse Specific)2-氨基-5-硝基-2'-氯二甲酮 三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)鐠(III)(＞98%(T))Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb2,6-二氯氯芐 三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)銪(III)(＞95%(T))Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb(三氟甲基)吡唑 三(6,6,7,7,8,8,8-七氟-2,2-二甲基-3,5-辛二酮基)鐠(Ⅲ)(>97.0%(T))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr751) (88H8) Mouse mAb2-溴-1-氯-氟 (S)-(+)-1,1'-聯(lián)萘基-2,2'-雙酸氫酯(>97.0%(T))FTO (D6Z8W) Rabbit mAbN-乙酰-L-氨酸 (R,R)-(-)-2,丁二(>96.0%(GC))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr740) (32A9) Rabbit mAbN-芐氧羰基-L-亮氨酸 (S,S)-(+)-2,丁二(>97.0%(GC))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr740) (32A9) Rabbit mAb()酸 (+)-芐甲基硅基乙酸(>98.0%(T))PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb2-甲氧基-氨基吡啶 (-)-芐甲基硅基乙酸(>98.0%(T))PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb氨基-2-甲氧基吡啶 (-)-樟腦烷酸(>98.0%(T))Phospho-PDGF Receptor α (Tyr849)/PDGF Receptor β (Tyr857) (C43E9) Rabbit mAb2-溴-5-代 (R)-(-)-N-(3,5-二甲酰)-α-乙Phospho-PDGF Receptor α (Tyr849)/PDGF Receptor β (Tyr857) (C43E9) Rabbit mAb芐氧基吲哚
反芻獸考德里氏體探針法熒光PCR檢測試劑盒雞表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒Pin1 肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體100 ul 雞半糖凝集素-3(Gal-3)ELISA試劑盒Phospho-Pin1 (Ser16) 酸化肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體20 ul 雞白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒PIWIL1 piwi樣1蛋白抗體100 ul 雞白介素9(IL-9)ELISA試劑盒PKA 蛋白激酶A抗體20 ul 雞白介素8(IL-8)ELISA試劑盒Phospho-PKA C (Thr197) 酸化蛋白激酶C亞性抗體100 ul 雞白介素6受體(IL-6R)ELISA試劑盒PKB/AKT-1 蛋白激酶B（來源抗體）20 ul 雞白介素6(IL-6)ELISA試劑盒PLASTIN3/T Plastin 絲束蛋白T Plastin抗體100 ul 雞白介素4(IL-4)ELISA試劑盒PLC beta 3/Phospholipase C beta 3 酯酶Cβ3抗體20 ul 雞白介素3(IL-3)ELISA試劑盒Phospho-PLC beta3 (Ser537) 酸化酯酶Cβ3抗體500µl |
點擊放大