熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 胰闊圓盤吸蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Eurytrema pancreaticum | 貨號 | YSP96704 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 馬來酸溴那敏(標準品)Phospho-Mre11 (Ser676) Antibody叔丁基三氯乙酰亞酯 扁蓄苷(標準品)WASP Antibody1-N-Boc-氧代-哌啶羧酸乙酯 匹莫丹KLC1 (D2T2R) Rabbit mAb2-吡啶甲酸 2-氨基-4'-氟二甲酮Phospho-Zyxin (Ser142/143) Antibody焦酸四芐酯 2-氨基-4'-氯二甲酮Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)3,5-二羥基甲酸 原百部(標準品)PTP-PEST (AG10) Mouse mAb(吡啶基)甲 雪上一枝蒿甲素E2A Antibody硫代硫酸鈉 麥冬皂苷D' VDAC Antibody氯化亞錫,無水 糠,2-呋喃VDAC Antibody氨基磺酸銨 芐氟噻Phospho-DRP1 (Ser637) Antibody溴-氟甲 蘭雪醌,白花丹醌,白花丹素(標準品)EGF Receptor (D1D4J) XP® Rabbit mAb (Neutralizing) (PE Conjuga)羥基甲酸乙酯 黃鐘花醌;拉帕 (標準品)HSP40 Antibody鉬酸 β-乙HSP60 (D85) Antibody硫代硫酸銨 亮菌甲素CD4 (RPA-T4) Mouse mAb (FITC Conjuga)三氟化銻 17α-羥基酮HSP60 (D307) Antibody硝酸鋁九水合物 21-乙酰氧基孕酮HSP40 (C64B4) Rabbit mAb嗎啉羧酸 珊瑚菜內酯,珊瑚菜素(標準品)HSP40 (C64B4) Rabbit mAb氟化氫 鞣花酸(標準品)HSP70 Antibody溴化鎂 胰闊圓盤吸蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒犀牛皮質酮(CORT)ELISA試劑盒AVPR2/FITC 熒光素標記精氨酸加壓素受體2抗體IgG100 ul 田鼠睪酮(T)ELISA試劑盒Axin1/FITC 熒光素標記軸蛋白1Axin proin 1抗體IgG20 ul 蘇丹紅ELISA試劑盒B7-DC/PDL2/CD273 /FITC 熒光素標記程序性死亡配體2抗體IgG100 ul 絲裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)ELISA試劑盒B7-H1/PDL1/CD274 /FITC 熒光素標記程序性死亡配體1抗體IgG20 ul 雙特異性絲裂原活化蛋白激酶5(MAP2K5)ELISA試劑盒B7-H4/FITC 熒光素標記B7H4抗體IgG100 ul 雙酚A(BPA)ELISA試劑盒BACE/ASP2 /FITC 熒光素標記β分泌酶抗體IgG100 ul 食蟹猴胰高血糖素(GC)ELISA試劑盒Bad/FITC 熒光素標記相關死亡促進因子Bad抗體IgG100 ul 食蟹猴C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒Bad/FITC 熒光素標記相關死亡促進因子Bad抗體IgG100 ul 石斑魚卵黃蛋白原(VTG)ELISA試劑盒Phospho-Bad(Ser112) /FITC 熒光素標記兔抗、大、相關死亡促進因子抗體IgG100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |