熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 路鄧葡萄球菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Staphylococcus lugdunensis | 貨號 | YSP97213 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 分泌型蛋白2(SPP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥95% 地霉雙足囊菌 1g 甾醇-O-?;D(zhuǎn)移酶2(SOAT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥95% 棒狀乳桿菌棒狀亞種 250mg 伸展蛋白(SNPH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) AR,90% 細(xì)極鏈格孢 100g N-磺氨基葡糖磺基氫化酶(SGSH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) AR,90% 氣生鞘氨醇單胞菌 25g 絲氨酸組合因子3(SERINC3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 三葉草根瘤菌 1g 生精蛋白Ⅱ(SEMG2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 枯草芽孢桿菌 25g 生精蛋白Ⅰ(SEMG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 空腸彎曲桿菌 5g 絲氨酸脫水酶(SDS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 多主棒孢 1g 硒代半胱氨酸裂解酶(SCLY)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 柑桔青霉 25g 肌切蛋白(SCIN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 蛹蟲草 5g 上池蛋白(SBSN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99%,無水級 細(xì)交鏈孢菌 100g 肉瘤抗原1(SAGE1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99%,無水級 ppic9K 500g 旋轉(zhuǎn)蛋白(RTTN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 美澳型核果褐腐病菌 5g 濕結(jié)合蛋白(RTBDN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 粟酒裂殖酵母 100g 休眠蛋白(RSN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 層出鐮孢 25g Repetin蛋白(RPTN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 鼠乳桿菌 5g RNA甲基轉(zhuǎn)移酶(RNMT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) >98.0%(GC) 簇生鏈格孢 1g 核黃素激酶(RFK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) >98.0%(GC) 小紅酵母 250mg 路鄧葡萄球菌探針法熒光PCR檢測試劑盒范可尼貧血相關(guān)蛋白F抗體IL-18 白介素-18100µl 卵泡抑素抗體IL-19 白介素-19100 ul Fas活化的絲/蘇氨酸激酶抗體IL-20 白介素-20100 ul 脆性組氨酸三聯(lián)體抗體IL-21 白介素-211 Kit 纖維母細(xì)胞表面蛋白抗體IL-22 白介素-22100 ul E受體4相關(guān)蛋白抗體IL-23 白介素-23100µg FLAG Tag標(biāo)簽抗體(N端)human PL-A2 (phospholipase A2) 脂酶A2100 ul 成纖維細(xì)胞生長因子受體2抗體Human visfatin 內(nèi)臟脂肪素100 ul 成纖維細(xì)胞生長因子受體4抗體Humen IFN- Alpha α-干擾素100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |