熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 武氏盾螨探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Acarapis woodi | 貨號 | YSP96327 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 替佐米/保特佐米C22H25-溴二十二烷 替佐米(標準品)C27H42O3甲基環(huán)己基二甲氧基硅烷 博舒替尼C45H72O161,雙(氨基基)-1,1,3,四甲基二硅氧烷 布地奈德C16H14O41,3二氯-1,1,3,四異基二硅氧烷 布地奈德(標準品)C5H7NOS十甲基環(huán)五硅氧烷 亞葉酸鈣C30H18O102-甲基-基-1,氧硫雜環(huán)己烷 亞葉酸鈣(標準品)C23H28O82,2-二甲基噻唑烷 喜樹堿C18H19-溴-2-甲基丁烷 喜樹堿(標準品)C14H21O5N3.HCl四甲基二乙烯基二硅氧烷 卡那替尼C27H42O4甲基*基硅烷 卡培他濱C17H24O3N-(2-氯乙基)吡咯烷 卡培他濱(標準品)C21H24O62-氯-2-(二氟甲氧基)-1,1,1-三氟乙烷 硫酸卷曲霉素C13H10O(S)-(-)-1,2-環(huán)氧丁烷 硫酸卷曲霉素(標準品)C30H50O5全氟己烷 卡立普多C9H10O52,2-雙(羥基-3,5-二基)烷 卡立普多(標準品)C21H22O6甲基-羧基-1-氧雜環(huán)丁烷 卡維地洛C25H22O102,二甲基己烷 卡維地洛(標準品)C27H32O14二氯-D2 武氏盾螨探針法熒光PCR檢測試劑盒豬催乳素(PRL)ELISA試劑盒ABCG1 三磷酸腺苷結合盒亞家族G1抗體100 ul 豬催產(chǎn)素(OT)ELISA試劑盒ABCG2 三磷酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員2抗體100 ug 豬促性腺激素抑制激素(GnIH)ELISA試劑盒ABCG4 ABC膜轉運蛋白抗體100 ul 豬促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒c-Abl 非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體100 ug 豬促腎上腺皮質激素(ACTH)ELISA試劑盒phospho-c-Abl(Tyr412) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體100 ug 豬促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒phospho-c-Abl(Tyr245) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體100 ug 豬促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒phospho-c-Abl(Tyr204) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體100 ul 豬促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒phospho-c-Abl(Thr735) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體100 ug 豬雌激素(E)ELISA試劑盒phospho-c-Abl(Tyr89) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體100 ug PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |