熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 莫氏立克次體探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Rickettsia mooseri | 貨號(hào) | YSP97142 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 防御素β136(DEFβ136)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 桔青霉 5g 防御素β135(DEFβ135)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 茶薪菇 100g 防御素β134(DEFβ134)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 雞松茸 25g 冠蛋白6(CORO6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 產(chǎn)紫青霉 500g YbeY金屬肽酶(YBEY)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% “冰川鹽單胞菌” 5g 免疫球蛋白重鏈(IGH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) >98.0%(GC) 蠟狀芽孢桿菌 1g ATP合酶8(ATP8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) >98.0%(GC) 糞生花褶傘 25g NADH脫氫酶2(ND2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) >98.0%(GC) 松杉靈芝 5g NADH脫氫酶3(ND3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 淡紫擬青霉 1g NADH脫氫酶4(ND4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% (HPLC) 病研所芽孢桿菌 25mg NADH脫氫酶5(ND5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% (HPLC) 冷湖黃桿菌 5mg NADH脫氫酶6(ND6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 球孢白僵菌 10g 信號(hào)素4G(SEMA4G)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 釀酒酵母 50g 肌球蛋白ⅠH(MYO1H)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 總狀共頭霉 10MG 分揀連接蛋白11(SNX11)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 扭托甲基桿菌 100mg 分揀連接蛋白12(SNX12)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 大球蓋菇 500mg B-黑色素瘤抗原3(BAGE3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 土曲霉 1g B-黑色素瘤抗原4(BAGE4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 齒孢青霉 250mg 莫氏立克次體探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒轉(zhuǎn)錄下調(diào)蛋白1抗體HPV16-E7/E7 proin(Human papillomavirus type 16) 類頭狀瘤病毒16抗原500 ul 脫氫酶/還原酶家族成員2抗體Hpt/HP(haptoglobin) 結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗原100 ul 牙本質(zhì)蛋白抗體H-ras/Ras/Ras p21 peptide 原癌基因H-ras抗原100 ul Dermokine β蛋白抗體HSTF2/HSF2 peptide 熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗原100 ul DPCR1蛋白抗體BCRP/ABCG2(breast cancer resistance proin) 癌耐藥相關(guān)蛋白(抗原)100 ul 表皮源性蛋白6抗體Hrasls3/HREV107(HRAS like suppressor 3) HRAS樣抑制因子3抗原500 ul 雙特異性蛋白酸酶7抗體HSP47(Heat shock proin-47) 熱休克蛋白-47抗原100 ul 雙特異性蛋白酸酶26抗體(絲裂原活化蛋白激酶酸酶8)HSP-90 Alpha(Heat Shock Proin 90 Alpha ) 熱休克蛋白90α抗體100 ul 阿米洛利結(jié)合蛋白1抗體HSP-105 (heat sock proin-105) 熱休克蛋白HSP105抗原300 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 |