客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
大鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Macrophage Colony-Stimulating Factor,M-CSF ELISA Kit 進(jìn)口/分裝

大鼠巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Macrophage-Derived Chemokine,MDC ELISA Kit 進(jìn)口/原裝

phospho-FAK(pSer732)(phospho-Focal adhesion kinase) 酸化粘著斑激酶抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

細(xì)胞死亡調(diào)解子抗體 Anti-Bim 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ECT2 (Thr790) 酸化上皮細(xì)胞癌轉(zhuǎn)化蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml

暗室燈 個(gè)

ZNF148 英文名稱： 鋅指蛋白148抗體 0.2ml

BXDC2 英文名稱： BXDC2蛋白抗體 0.2ml

Anti-RECK 金屬蛋白酶抑制因子RECK抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

M-CSF 小鼠巨噬細(xì)胞-集落刺激因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-phospho-FAK (Ser732) 酸化粘著斑激酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rat IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml

VC(Human Vitamin C) ELISA Kit 人維生素C 96T

Slc22A17 英文名稱： 可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白22A17抗體 0.1ml

3% NaC1氨基酸脫羧酶對照發(fā)酵管20支3% NaC1氨基酸脫羧酶對照發(fā)酵管BR

3.5% NaC1氨基酸脫羧酶對照發(fā)酵管20支3.5% NaC1氨基酸脫羧酶對照發(fā)酵管BR

鳥氨酸脫羧酶肉湯發(fā)酵管20支鳥氨酸脫羧酶肉湯發(fā)酵管BR

3% NaC1鳥氨酸脫羧酶發(fā)酵管20支3% NaC1鳥氨酸脫羧酶發(fā)酵管BR

3.5% NaC1鳥氨酸脫羧酶發(fā)酵管20支3.5% NaC1鳥氨酸脫羧酶發(fā)酵管BR

精氨酸脫羧酶對照發(fā)酵管20支精氨酸脫羧酶對照發(fā)酵管BR
龜分枝桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒細(xì)胞角蛋白15抗體Plexin A2/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)叢蛋白A2抗體IgG1 Kit

1號(hào)染色體開放閱讀框103抗體Plexin B1/Semaphorin receptor/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)叢蛋白B1抗體IgG100 ul

兒茶酚O甲基移位酶抗體PLASTIN3/T Plastin/FITC  熒光素標(biāo)記絲束蛋白T Plastin抗體IgG100 ul

補(bǔ)體C1qTNF9鏈多肽抗體PLG/FITC  熒光素標(biāo)記纖維蛋白溶酶原抗體IgG100 ul

平滑肌鈣調(diào)蛋白CNN2抗體PLGF/FITC  熒光素標(biāo)記胎盤生長因子抗體IgG100 ul

心肌病相關(guān)蛋白2PLGF /FITC  熒光素標(biāo)記胎盤生長因子（抗體）IgG100 ul

5號(hào)染色體開放閱讀框34抗體PLGF/FITC  熒光素標(biāo)記胎盤生長因子抗體IgG100 ul

E1A激活基因刺激蛋白1抗體PMP2 /FITC  熒光素標(biāo)記周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2抗體IgG100 ul

2號(hào)染色體開放閱讀框42抗體PMP-22/FITC  熒光素標(biāo)記外周髓鞘蛋白-22IgG500 ul
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。