熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 肉毒梭狀芽孢桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Clostridium botulinum | 貨號 | YSP96555 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 硬脂酸(分析標準品,≥99.5%(GC))BTAF1 Antibody六氫鄰二甲酰亞 甜蜜素(標準品)VEGF Receptor 3 (C28G5) Rabbit mAb1,2,3,6-四氫鄰二甲酰亞 L-山梨糖(標準品)Fibrillarin (C13C3) Rabbit mAb硒化鋁 糖精鈉 水合物(標準品)Fibrillarin (C13C3) Rabbit mAb5-氟煙酸 鈣標準溶液(1000µg/mL,基體:5%HCI)Phospho-PRAS40 (Thr246) Antibody氨基吡啶-2-羧酸 鎘標準溶液(1000μg/ml,介質(zhì):1.0mol/L 硝酸)Phospho-EGF Receptor (Tyr998) (C24A5) Rabbit mAb氟-2,吲哚二酮 銫標準溶液(1000μg/ml,溶劑:水)α-Synuclein Antibody2-吡咯甲 鈰標準溶液(1000μg/ml)Acetyl-Histone H4 (Lys16) (E2B8W) Rabbit mAb (PE Conjuga)六氟酸四乙銅 標準溶液(0.05000mol/L(0.1N))GLI1 (L42B10) Mouse mAb1,5-萘二磺酸 標準溶液(1000μg/ml,溶劑:水)α/β-Synuclein (Syn205) Mouse mAb氯甲酸異酯 鉛標準溶液(1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L 硝酸)α/β-Synuclein (Syn205) Mouse mAb吡唑酸頻哪酯 鈧標準溶液(1000μg/ml,基體:1.0mol/L HNO3)GATA-6 (D61E4) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)甲基四氫鄰二甲酸酐 標準溶液(1000μg/ml,溶劑:二硫化碳)EGF Receptor (C74B9) Rabbit mAb硝基-1-萘 標準溶液(0.96mg/ml,溶劑:甲)α-Synuclein (Syn204) Mouse mAb溴化鈦 鄰硝基氯標準溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)α-Synuclein (Syn204) Mouse mAbN-丁基咪唑 間氯酚標準溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)Methyl-Histone H3 (Lys4) Antibody Sampler Kit氧化鏑 2,5-二甲酚標準溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)VCP Antibody三氯化 一氯二溴標準溶液(387±18μg/ml,溶劑:甲)VCP (7F3) Rabbit mAb3,3',4,4',5-五溴聯(lián) 肉毒梭狀芽孢桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒Ⅳ型前膠原氨基末端肽(PⅣNP)ELISA試劑盒MYOG/Myogenin 肌紅蛋白抗體(肌細胞生成素)100 ul Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試劑盒Nephrin 去氧腎上腺素抗體20 ul 4-羥基壬酸(HNE)ELISA試劑盒nectin 2/CD112 細胞黏附分子CD112抗體100 ul 40S核糖體蛋白S19(RPS19)ELISA試劑盒Nestin 巢蛋白/神經(jīng)上皮干細胞蛋白抗體20 ul Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)ELISA試劑盒Nestin 巢蛋白/神經(jīng)上皮干細胞蛋白抗體(大、)100 ul Ⅲ型前膠原氨基末端肽(PⅢNP)ELISA試劑盒Neurobeachin 蛋白激酶錨定蛋白抗體100 ul Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA試劑盒AKAP95 蛋白激酶A錨定蛋白95抗體100 ul Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒NeuN 神經(jīng)元核抗原抗體100 ul Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)ELISA試劑盒Nrn1/Cpg15/Neuritin 轉(zhuǎn)化神經(jīng)突起蛋白抗體20 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |